抗牛型结核杆菌单克隆抗体的制备和鉴定

摘要

运用杂交瘤细胞技术，以牛型结核分支杆菌免疫BALB/C小鼠，取小鼠脾细胞和SP2/0细胞进行融合。用酶联免疫吸附法(Enzyme-LinkImmunosorbentAssay，ELISA)检测杂交瘤细胞培养液上清，强阳性孔用有限稀释法克隆培养，直到阳性率达到100﹪。经过4次克隆后，得到了2株能稳定分泌抗牛型结核杆菌抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为5D4和4C3，并对它们的特性作了初步鉴定。经ELISA鉴定，2株单克隆抗体均为IgG1亚类。对单克隆杂交瘤细胞株的染色体计数结果为：5D4细胞株染色体平均数为103条，4C3细胞株染色体平均数为105条。用ELISA检测腹水和细胞上清的效价：两株单抗的腹水效价可达1：104-105，而5D4细胞上清效价为1：2560，4C3为1：1280。同时分析了2株单抗的抗原位点，结果表明2株单抗针对不同的抗原位点。在单抗的SDS-PAGE电泳实验中，5D4和4C32株单抗的重链分子量均为50KD左右，5D4轻链分子量为30KD左右，而4C3为25KD左右。在单抗的稳定性试验中，两株细胞在四次克隆化培养的细胞上清的OD450均有上升趋势，四代腹水的抗体效价均在1：104-105之间，说明有较好的稳定性。单抗的特异性试验结果显示：2株单抗均与大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等不发生交叉反应，但都与人型结核分支杆菌有不同程度的交叉反应。利用胶体金免疫层析技术制备了牛结核杆菌免疫胶体金诊断试纸条作应用性鉴定。在灵敏度试验中，该试纸条可检出106CFU/mL；在特异性试验中，该试纸条与大肠杆菌、沙门氏菌、李氏杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌等不发生交叉反应，只与人型结核杆菌发生交叉反应，说明该试纸条有较高的灵敏度和较强的特异性。免疫胶体金层析技术具有检测灵敏度高，特异性强，准确度高，重复性好，操作简单、方便等优点。该免疫胶体金诊断试纸条的特征和应用于牛结核病的诊断价值有待进一步的评估。

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文摘

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论文说明：缩略词

前言

1.材料

2.方法

3结果

4.讨论

5结论

文献综述牛结核病的诊断技术研究进展

致谢

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