猪戊型肝炎病毒swCH189株全基因组序列克隆及ORF2的原核表达

摘要

本研究设计7对PCR套式引物，应用RT-PCR方法及RACE末端扩增法，分片段扩增了猪戊型肝炎病毒甘肃省分离株swCH189全基因组序列。swCH189基因组长为7284nt，GenBank登录号FJ610232，除3’端poly（A）尾外，基因组长为7171nt，共有3个ORFs，ORF1长5124bp，编码1708aa。ORF2长2025bp，编码674aa，ORF3长345bp，编码114aa。其基因组结构特征与HEV基因Ⅳ型一致。HEVswCH189株与其他毒株全基因组序列核苷酸同源性为73.7%～89.6%；ORF2核苷酸同源性为79.1%～91.8%. swCH189株ORF1与已报道的Ⅰ～Ⅲ型毒株的ORF1氨基酸同源性为78.8%～86.9%，而与Ⅳ型毒株的同源性达93.7%～97.6%。swCH189株ORF2与已报道的Ⅰ～Ⅲ型毒株的氨基酸同源性为87.5%～92.4%，与Ⅳ型毒株的同源性为95.9～98.2%。swCH189株ORF3与已报道的Ⅰ～Ⅲ型毒株的氨基酸同源性为75.2%～84.0%，与Ⅳ型毒株的同源性为97.5%～99.2%。系统进化树分析显示，swCH189株属HEV基因Ⅳ型。 成功构建了pET32a（+）-CP239表达质粒，并在大肠杆菌Rosseta中获得表达。表达蛋白编码序列对应于ORF2序列的第1142～1870nt，表达的重组蛋白大小为45.3kDa并经westernblot检测证实其具有抗体结合活性。

目录

文摘

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论文说明：英文缩略词表

声明

引言

第一篇文献综述

第一章猪戊型肝炎病毒研究进展

1.1形态特征

1.2理化特性

1.3 HEV分类地位

1.4 HEV基因组结构

1.5戊型肝炎的流行病学

1.6细胞培养

1.7HEV诊断

1.8免疫和防制

第二篇研究内容

第一章猪戊型肝炎病毒的分离与鉴定

1.1实验材料与方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

第二章猪戊型肝炎病毒全基因序列的扩增与分析

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

第三章猪戌型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因ORF2部分片段的原核表达

3.1材料与方法

3.2目的基因片段的诱导表达

3.3讨论

3.4小结

结论

参考文献

附录

导师简介

致谢