匍匐翦股颖高效再生体系的建立及农杆菌介导的溶菌酶-GFP基因的转化

摘要

匍匐翦股颖（Agrostis．stolonifera．L），英文名Creeping Bentgrass。它具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性，并耐低度修剪。利用转基因技术培养匍匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。本研究的目的是利用农杆菌介导法，将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中，以提高其抗病性能。 本文比较了3个匍匐翦股颖育成品种（潘娜1号、海滨、普特）的再生能力，建立了这三个品种的植株再生体系，从中筛选出再生能力较强的品种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内容及结果如下： 1．建立了匍匐翦股颖三个品种植株再生体系。以匍匐翦股颖潘娜1号、海滨和普特的成熟种子为外植体，进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。结果表明：在MS培养基上，以不同浓度2，4-D诱导潘娜1号、海滨和普特的愈伤组织时，普特的愈伤组织诱导率高于潘娜1号和海滨。2mg/L2，4-D+0．1 mg/L6-BA为潘娜1号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合，3mg/L2，4-D+0．1 mg/L6-BA为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为45．2%、76．5%、87．0%； MSO为最适合的分化培养基，分化率分别为50．0%、59．0%、57．6%。1/2MS+1．0mg/LIBA为生根培养基。经比较海滨、普特的再生能力优于潘娜1号。 2．探索了匍匐翦股颖基因转化的影响因素，建立了其基因转化体系。以培养10周的匍匐翦股颖海滨、普特品种愈伤组织为外植体，以农杆菌菌株为介体，研究了该品种基因转化的若干影响因素，结果如下：匍匐翦股颖对卡那霉素不敏感，因此利用卡那霉素筛选匍匐翦股颖抗性品种没有效果；抑菌剂选取羧苄青霉素为宜，浓度为300mg/L；浸染时间为10min为宜；菌液浓度OD600=0．3～0．5，与农杆菌共培养3天有利于转化。本试验得到46株转化植株，19株为普特品种，27株为海滨品种。取4株海滨品种和4株普特品种经荧光检测和PCR检测均呈阴性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

前言

第一章文献综述

1草坪草的遗传转化研究进展

1.1草坪草概述

1.2草坪草的遗传转化

2匍匐翦股颖抗病性的研究进展

2.1研究现状

2.2国内外研究进展

2.3匍匐翦股颖抗病研究的前景展望

3溶菌酶的研究进展

3.1溶解酶的理化性质

3.2溶菌酶的分布

3.3溶菌酶的作用机理

3.4溶菌酶的作用

3.5溶菌酶的应用

4绿色荧光蛋白GFP的研究进展

4.1 GFP基础理论研究进展

4.2 GFP的结构、生化特性、发光机制

4.3 GFP的应用特点及其改进

4.4 GFP在转基因研究中的应用

第二章匍匐翦股颖不同品种植株再生体系的建立

1.材料与方法

1.1实验材料

1.2试验方法

2结果与分析

2.1愈伤组织的诱导

2.2愈伤组织的分化培养

2.3不同IBA浓度对生根的影响

2.4组培苗的移栽

3讨论

3.1影响愈伤组织诱导率的因素

3.2影响愈伤组织分化的因素

4小结

第三章农杆菌介导PBI121-lyz-GFP基因对匍匐翦股颖转化的研究

1.材料与方法

1.1材料

1.2试验方法

2.结果与分析

2.1农杆菌培养中抗菌素及其浓度的确定

2.2抗菌素浓度对匍匐翦股颖愈伤组织增殖的影响

2.3卡那霉素对种子发芽和愈伤组织增殖的影响

2.4转化体系的建立

3.讨论

3.1抗生素对愈伤组织生长的影响

3.2农杆菌转化方法在单子叶植物中的应用

3.3农杆菌菌株对转化的影响

4.小结

致 谢

参考文献

附图

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