活血通督汤对兔脊髓缺血再灌注损伤后肢运动功能及细胞凋亡的影响

摘要

目的：
　　通过观察活血通督汤对家兔脊髓缺血再灌注损伤后肢运动功能及细胞凋亡因子c-fos、c-jun表达的影响，探讨该方的作用机制。
　　方法：
　　1、后肢运动功能的作用观察:24只新西兰家兔，雌雄不限，体重2000±200g，按照随机数字法分为假手术组，缺血再灌注组，活血通督汤组，每组8只。假手术组:生理盐水灌胃，b.i.d，术前1周，术后3周;缺血再灌注组:生理盐水灌胃，b.i.d，术前1周，术后3周;活血通督汤组:活血通督汤灌胃，b.i.d，术前1周，术后3周。假手术组仅分离L3-6，缺血再灌注组及活血通督汤组分离并夹闭L3-6，30min后松开动脉夹恢复血流制成脊髓缺血再灌注损伤模型。观察再灌注8h、24h、1w、2w、3w共五个时间点的后肢运动功能并采用Jacobs法对家兔后肢运动功能评分。
　　2、机制探讨:96只新西兰家兔，雌雄不限，体重2000±200g，按照随机数字法分为假手术组、缺血再灌注组、活血通督汤组，每组32只。每组中再分为再灌注0.5h、1h、4h、8h四个亚组，每个亚组8只家兔。假手术组:生理盐水灌胃，b.i.d，术前1周;缺血再灌注组:生理盐水灌胃，b.i.d，术前1周;活血通督汤组:活血通督汤灌胃，b.i.d，术前1周。假手术组仅分离L3-6，缺血再灌注组及活血通督汤组分离并夹闭L3-6，30min后松开动脉夹恢复血流制成脊髓缺血再灌注损伤模型。三组分别于造模成功后再灌注0.5h、1h、4h、8h共四个时间点取家兔的脊髓，采用Western-blot法检测脊髓组织中c-fos、c-jun蛋白的含量，并用免疫组化法检测脊髓组织c-fos、c-jun阳性细胞的表达量。
　　结果：
　　1、在脊髓缺血再灌注8h、24h、1w、2w、3w共五个时间点，假手术组的后肢运动功能均正常，与术前无明显变化;缺血再灌注组及活血通督汤组Jacobs评分均低于假手术组，与假手术组比较差异显著（P＜0.01）。缺血再灌注组及活血通督汤组脊髓缺血再灌注8h，Jacobs评分均下降，其中缺血再灌注组下降明显，两组比较差异统计学意义显著（P＜0.01);脊髓缺血再灌注8h-24h，缺血再灌注组及活血通督汤组后肢运动功能恢复缓慢，脊髓缺血再灌注24h，两组比较有显著统计学意义（P＜0.01）。随着脊髓缺血再灌注时间的延长，在24h-3w，缺血再灌注组后肢运动功能恢复不明显，活血通督汤组后肢运动功能恢复明显，与缺血再灌注组在1w、2w、3w三个时间段Jacobs评分比较有显著性差异（P＜0.01）。
　　2、c-fos和c-jun蛋白在假手术组0.5h、1h、4h、8h四个时间点都有轻度表达;在缺血再灌注组和活血通督汤组中0.5h表达上升，到1h时均达到最高峰，之后开始持续降低。在相同的时间点，缺血再灌注组及活血通督汤组中c-fos和c-jun的表达量均高于假手术组，且有显著性差异（P＜0.01）;活血通督汤组中四个时间点c-fos和c-jun的表达量均低于缺血再灌注组，差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。
　　结论：
　　1、活血通督汤可改善早期脊髓缺血再灌注损伤，促进家兔后肢运动功能恢复;
　　2、活血通督汤通过抑制脊髓组织中c-fos和c-jun蛋白表达，减少脊髓神经细胞凋亡，从而改善脊髓缺血再灌注损伤。

目录

声明

摘要

英文缩略语表

前言

1 实验材料与方法

1．1 实验试剂与仪器

1．2 实验动物

1．3 药物干预与剂量

1．4 实验动物分组、造模及鉴定

1．5 兔后肢运动功能评分

1．6 取材及指标检测

1．7 统计学方法

1．8 技术路线图

2 结果

2．1 兔后肢运动功能评分

2．2 免疫组化法检测家兔脊髓c-fos表达量

2．3 免疫组化法检测家兔脊髓c—jun表达量

2．4 Western-blot法检测家兔脊髓c-fos蛋白表达量

2．5 Western—blot法检测家兔脊髓c-jun蛋白表达量

3 分析与讨论

3．1 活血通督汤的组方剖析

3．2 活血通督汤的现代药理研究

3．3 脊髓缺血再灌注损伤模型的建立与评价

3．4 活血通督汤对脊髓缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响及作用机制

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述

作者简历