苁蓉精水提液干预帕金森病模型小鼠中脑GSK-3β及相关蛋白的实验研究

摘要

目的:
　　本课题通过观测苁蓉精水提液对帕金森病(parkinson disease，PD)模型小鼠中脑组织GSK-3β及相关蛋白表达的影响，探寻补肾复方苁蓉精对PD的可能作用机制，为PD的临床治疗提供理论依据。
　　方法:
　　8周龄健康C57BL/6雄性小鼠连续7日腹腔注射MPTP(30mg/kg/day)建立PD模型。将造模成功的PD小鼠随机分为模型组、苁蓉精低剂量组、苁蓉精中剂量组、苁蓉精高剂量，每组10只;并随机选取健康C57BL/6雄性小鼠10只作为正常组。依据人与小鼠体表面积换算得出苁蓉精低、中、高剂量浓度分别为4g/kg，8g/kg，16g/kg。分别给予苁蓉精低剂量组、苁蓉精中剂量组和苁蓉精高剂量组连续14日灌胃，余组小鼠予等体积生理盐水灌胃14日。第14天检测小鼠游泳实验、自主活动实验等行为学改变。行为学检测结束后麻醉处死小鼠并按要求取材，HPLC法检测小鼠中脑黑质DA含量，WB检测小鼠中脑GSK-3β、tau、α-synuclein、Bcl2、Bax等蛋白表达变化的情况。
　　结果:
　　1.行为学观察发现，与正常组比较，模型组小鼠的游泳静止时间增加，站立次数减少，有显著性差异(P＜0.01)，出现了行为障碍。苁蓉精高剂量组小鼠与模型组小鼠相比，游泳静止时间明显缩短，自主活动能力明显增强，有显著性差异(P＜0.01)，行为障碍有所改善。
　　2.HPLC检测DA水平显示，与正常组相比，模型组小鼠脑内DA含量明显减少，有显著性差异(P＜0.01)。苁蓉精低剂量组与模型组小鼠相比，脑内DA含量无明显差异;但苁蓉精中、高二组小鼠脑内的DA含量增高;苁蓉精高剂量组DA含量明显高于模型组，有显著性差异(P＜0.01)。
　　3.GSK-3β、tau、α-synuclein蛋白表达的变化。结果显示，模型组小鼠与正常组相比，模型组的GSK-3β、tau表达量无明显差异，但α-synuclein蛋白和磷酸化的GSK-3β、tau蛋白的表达量均显著升高，有显著性差异(P＜0.01);与模型组相比，苁蓉精水提液干预后，各给药组GSK-3β、tau表达量无明显差异，但α-synuclein以及磷酸化的GSK-3β、tau蛋白的表达量均显著降低，有显著性差异(P＜0.01)。
　　4.与正常组相比，模型组小鼠脑内Bcl2蛋白表达明显减少，Bax蛋白表达明显增加，有显著性差异(P＜0.01)。苁蓉精高剂量组较模型组小鼠中脑内Bcl2蛋白表达明显增加，Bax蛋白表达明显减少，有显著性差异(P＜0.01)。
　　结论:
　　1.苁蓉精能够提高MPTP诱导的PD模型小鼠中脑黑质DA的含量，改善其行为学障碍。
　　2.苁蓉精具有抗细胞凋亡作用，能降低MPTP诱导的PD模型小鼠脑内GSK-3β活性，从而对多巴胺能神经元起保护作用。
　　3.苁蓉精可以通过降低GSK-3β的活性，抑制tau蛋白的过度磷酸化，降低α-synuclein的表达，从而减轻多巴胺能神经元的损伤，这可能是苁蓉精对PD治疗有效的作用机制。

目录

声明

主要缩略词索引表

摘要

前言

材料和方法

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 实验试剂

1．3 实验药物

1．4 实验仪器

2 实验方法

2．1 药物试剂的配制

2．2 实验动物造模与分组

2．3 实验动物给药

2．4 实验动物行为学观察

2．5 实验动物的取材和处理

2．6 HPLC检测小鼠中脑黑质DA含量的变化

2．7 免疫蛋白印迹法分析中脑组织GSK-3 β及相关蛋白的表达

3 统计分析方法

实验结果

1 实验动物行为学观察

2 苁蓉精水提液对PD模型小鼠DA含量的影响

3 苁蓉精水提液对PD模型小鼠GSK-3 β、Tau、α-synuclein表达的影响

4 苁蓉精水提液对PD模型小鼠Bcl2、Bax表达的影响

讨论

1 PD的发病机理研究与治疗现状

1．1 PD的发病机理研究

1．2 PD的治疗现状

2 PD的中医机理探讨

2．1 中医对PD的认识

2．2 补肾复方苁蓉精组方特点

3 补肾复方苁蓉精治疗PD的机理

3．1 补肾复方对GSK-3 β及相关蛋白表达的影响

3．2 补肾复方苁蓉精治疗PD的可能作用机制探讨

4 问题与展望

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述

作者简历