苁蓉精对帕金森病模型小鼠胶质细胞源性神经营养因子的影响

摘要

目的:
　　本课题通过建立帕金森病模型小鼠，观察苁蓉精对帕金森病模型小鼠行为学障碍的作用及对多巴胺能神经元的保护作用，并通过相关检测方法，检测模型小鼠大脑内胶质细胞源性神经营养因子的表达，为苁蓉精的临床应用提供相应的基础研究支持。
　　方法:
　　8周龄C57BL/6雄性小鼠50只，随机分为正常组、模型组、苁蓉精低剂量组、苁蓉精中剂量组、苁蓉精高剂量组5组。连续7日腹腔注射MPTP30mg/kg建立PD模型。依据人与小鼠体表面积换算得出苁蓉精低、中、高剂量浓度分别为4g/kg，8g/kg，16g/kg。建立模型同时，分别给予苁蓉精低剂量组、苁蓉精中剂量组和苁蓉精高剂量组连续14日灌胃，余组小鼠予等体积生理盐水灌胃14日。给药同时观察小鼠行为学改变。干预结束后，通过HPLC、免疫组织化学、western blot和实时荧光定量PCR等手段检测脑内DA、 TH、Bcl2、Bax、GDNF及其受体GFRα1、Ret等表达变化的情况。
　　结果:
　　通过行为学观察发现，与正常组比较，模型组小鼠的游泳静止时间增加，站立次数减少，出现了行为学障碍。苁蓉精各组小鼠与模型组小鼠相比，游泳静止时间缩短，自主活动能力增强，行为学障碍均有改善。HPLC检测DA水平显示，苁蓉精低、中、高三组小鼠脑内的DA含量呈现剂量依赖性的增高，苁蓉精高剂量组DA含量明显高于模型组。免疫组织化学染色法检测显示，模型组小鼠脑内TH阳性细胞表达较正常组相比明显减少，予苁蓉精干预后，小鼠黑质部分TH阳性细胞表达增多，蛋白免疫印迹结果显示，TH蛋白表达水平增加。免疫组化法检测黑质部分GDNF及其受体GFRα1、Ret阳性细胞表达变化，使用western blot和实时荧光定量PCR检测蛋白和mRNA表达的变化，结果显示，模型组小鼠GDNF及其受体GFRα1、Ret的表达与正常组相比均明显降低，苁蓉精高剂量组与模型组相比均明显升高。同时，免疫蛋白印迹检测显示，苁蓉精各组小鼠中脑组织中Bcl2表达增加，Bax表达减少。
　　结论:
　　1.苁蓉精能改善MPTP诱导的PD模型小鼠脑内TH的表达，改善模型小鼠黑质部分DA的合成，从而改善其行为学障碍。
　　2.苁蓉精能提高MPTP诱导的PD模型小鼠黑质部分GDNF及其受体的表达，具有抗细胞凋亡作用，从而对DA能神经元起保护作用。
　　3.临床上苁蓉精对PD治疗有效的作用机制可能是通过增加脑内内源性GDNF的含量，从而减轻DA能神经元的损伤凋亡。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

1 实验材料与仪器

1．1 实验动物

1．2 实验药物

1．3 实验试剂

1．4 实验仪器

1．5 实验主要试剂的配制

2 实验方法

2．1 实验动物分组

2．2 实验动物造模与给药

2．3 实验动物行为学观察

2．4 实验动物取材和处理

2．5 高效液相色谱分析法检测DA含量的变化

2．6 免疫组织化学染色法观察TH、GDNF及其受体的表达

2．7 实时荧光定量PCR分析GDNF及其受体基因的表达

2．8 蛋白免疫印迹法分析TH、GDNF及其受体、Bcl2、Bax蛋白的表达

3 统计学方法

实验结果

1 实验动物行为学观察

1．1 游泳实验

1．2 自主活动实验

2 苁蓉精对MPTP诱导的PD模型小鼠DA含量的影响

3 苁蓉精对MPTP诱导的PD模型小鼠TH表达的影响

3．1 小鼠中脑黑质部分TH阳性细胞的表达

3．2 小鼠中脑黑质部分TH蛋白的表达

4 苁蓉精对MPTP诱导的PD模型小鼠GDNF及其受体GFRα1、Ret表达的影响

4．1 小鼠中脑黑质部分GDNF及其受体GFRα1、Ret阳性细胞的表达

4．2 小鼠中脑黑质部分GDNF及其受体GFRα1、Ret蛋白的表达

4．3 小鼠中脑黑质部分GDNF及其受体GFRα1、Ret mRNA的表达

5 苁蓉精对MPTP诱导的PD模型小鼠Bcl2、Bax表达的影响

讨论

1 帕金森病

2 胶质细胞源性神经营养因子

2．1 胶质细胞源性神经营养因子的分布

2．2 胶质细胞源性神经营养因子受体

2．3 胶质细胞源性神经营养因子的生理作用

3 帕金森病与胶质细胞源性神经营养因子

4 帕金森病与苁蓉精复方

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述 GDNF对多巴胺能神经元保护作用的研究进展

作者简历