基于GC-MS、GC-FID技术的药物质量控制与体内代谢研究应用

摘要

气相色谱法适用于挥发性成分的分析，较液相色谱法其发展应用较早，商品化程度也高。通过联用不同的分析技术和检测器并发展不同的前处理方法，也使气相色谱法的应用越来越广。本课题基于GC-MS、GC-FID技术对三种药物进行研究，为此技术在药物质量控制与体内代谢的研究提供应用实例，具体研究内容如下:
　　一、富马酸替诺福韦二吡呋酯中杂质的GC-MS/FID分析
　　采用GC-MS法对富马酸替诺福韦二吡呋酯(TDF)中的挥发性杂质进行定性分析，确定样品有少量异丙醇残留。在此基础上，首次建立同时测定TDF中丙酮、异丙醇、二氯甲烷、异丙醚、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺、氯甲基异丙基碳酸酯和N-甲基吡咯烷酮八种有机溶剂的GC-FID测定方法。经完整的方法学验证，表明该方法可应用于TDF溶剂残留量的检测。八种溶剂均能完全分离，在考察的浓度范围内，线性关系良好，R2=0.9990～0.9998;精密度RSD均小于3％，平均回收率为99.18％～101.87％。3批样品中有机溶剂残留量均在规定的限度范围内。结果表明该法灵敏、准确、可靠，可用于TDF中八种有机溶剂残留量的检测。
　　二、栀子厚朴汤挥发性成分的分析及其脂溶性成分提取方法的优化
　　采用水蒸气蒸馏法提取栀子厚朴汤、组方中的各单味药及其药对的挥发油，对挥发油中的成分进行GC-MS的定性分析及其相对含量的分析。共鉴定挥发油成分121个，在栀子、厚朴、枳实及栀子厚朴汤的挥发油中分别鉴定了57、68、41及82个成分。确定栀子厚朴汤挥发油的主要成分包括D-柠檬烯、β-桉叶油醇、α-枝叶油醇和γ-桉叶油醇，占总挥发油的80.37％，表明这些成分是其挥发油的主要组成部分。
　　在此基础上，首次采用加速溶剂萃取-分散液相微萃取(ASE-DLLME)技术应用于栀子厚朴汤有效成分的提取，通过单因素试验和响应面设计法优化加速溶剂萃取-分散液相微萃取方法，确定最佳ASE提取条件:以55％的乙醇，提取温度为160℃，提取8min，循环一次。DLLME最佳萃取条件:样品稀释制成20％的乙醇供试品溶液，100μL乙醇为分散剂，30μL二氯化碳为萃取剂。同时，在ASE-DLLME提取的栀子厚朴汤中共鉴定了61个成分，主要成分为厚朴酚(44.48％)、和厚朴酚(36.55％)，占总提取物的81.029％。与其他有机溶剂提取方法进行比较，ASE-DLLME技术在很大程度上减少了药材中挥发性成分的损失，并有效地提取出药材中的脂溶性成分，可为栀子厚朴汤脂溶性成分的研究提供技术支持。
　　三、速效救心丸挥发性成分及其代谢产物在SD大鼠体内的血浆药代动力学研究
　　利用GC-MS技术对速效救心丸入血成分进行分析，确定血浆样品中含有樟脑、异龙脑和龙脑，其中樟脑是其在体内代谢得到的产物。进而建立了快速、灵敏的测定SD大鼠血浆样品中这三种成分的测定方法。经完整的方法学验证，表明该方法能够满足临床前药代动力学研究中的技术要求，可用于樟脑、异龙脑、龙脑在SD大鼠体内的药代动力学研究。应用已建立的方法首次测定SD大鼠舌下含服速效救心丸不同时间点三种成分的血药浓度，明确其在SD大鼠体内药代动力学参数。结果表明异龙脑和龙脑的吸收代谢变化趋势基本一致，而樟脑在体内的血药浓度会随着龙脑与异龙脑的变化而变化。三种成分Tmax均小于1.5h，表明这三种成分在SD大鼠体内吸收快。

目录

声明

摘要

前言

第一章 富马酸替诺福韦二吡呋酯中残留溶剂的GC-MS／FID分析

1 仪器和试药

1．1 仪器

1．2 药品与试药

2 方法与结果

2．1 溶液的制备

2．2 富马酸替诺福韦二吡呋酯挥发性杂质分析

2．3 TDF溶剂残留量的分析

3 讨论

3．1 进样方法的选择

3．2 溶剂及内标的选择

3．3 色谱条件的优化

4 小结

第二章 栀子厚朴汤挥发性成分的分析及脂溶性成分提取方法的优化

第一节 栀子厚朴汤、各单味药及其药对挥发性成分的分析

1 仪器和试药

2 实验方法

3 结果与讨论

4 小结

第二节 基于ASE-DLLME-GC-MS栀子厚朴汤脂溶性成分的提取及分析

1 仪器和试药

2 实验方法

3 结果与讨论

4 小结

第三章 速效救心丸挥发性成分及其代谢产物在SD大鼠体内的血浆药代动力学研究

第一节 速效救心丸入血成分的GC-MS分析

1 仪器和试药

2 实验方法

3 结果与讨论

4 小结

第二节 樟脑、异龙脑和龙脑三种成分定量分析方法的建立与确证

1 仪器和试药

2 实验方法

3 结果与讨论

4 小结

第三节 速效救心丸挥发性成分及其代谢产物在大鼠血浆药代动力学研究

1 仪器和试药

2 实验方法

3 结果

4 小结

结论

参考文献

致谢

文献综述 气相色谱法在药物体内外代谢前处理方法中研究进展

作者简历