没食子酸体外抗人四型腺病毒(HAdV--4)作用及机制研究

摘要

目的：探索没食子酸(Gallic acid，GA)对人四型腺病毒(Human adenovirus type four，HAdV-4)的体外抑制作用及其机制。
　　方法：通过采用细胞培养，细胞病变效应(CPE，cytopathic effect)观察等实验来确定没食子酸的安全用药范围，采用SPSS软件probit回归求得最大无毒浓度(TC0)，半数中毒浓度(TC50); TCID50法测定腺病毒的毒力;MTT细胞毒性实验测得没食子酸对腺病毒的体外抑制作用;实时荧光定量PCR技术来测定没食子酸对腺病毒基因拷贝数的影响;蛋白免疫印迹法(western blot)检测没食子酸对腺病毒蛋白外壳合成的抑制作用。
　　结果：没食子酸对A549细胞的最大无毒浓度为TC0=32.75μM，半数中毒浓度TC50=279.906μM。采用Reed-Munch法计算HAdV-4在A549细胞中的TCID50为10-6.5/100μL。MTT法测得在四种加药方式对腺病毒的抑制率分别为:灭活作用(73.19％*)＞吸附抑制作用(59.68％*)＞生物合成抑制作用(13.06％*)＞对细胞的保护作用(3.15％＃)((*P＜0.05)，(＃P＞0.05))。实时荧光定量PCR法和western blot法测得其对腺病毒的抑制作用与MTT法基本一致。
　　结论：没食子酸抗人四型腺病毒作用主要在于其体外灭活病毒，从而影响病毒对细胞的吸附作用;其次对人四型腺病毒在生物合成阶段有一定抑制作用，包括可以抑制腺病毒的核酸和蛋白的合成，但其对保护细胞阻止腺病毒入侵无明显作用。

目录

声明

中英文缩略词对照表

摘要

引言

第一章 没食子酸对人四型腺病毒感染后细胞形态和存活率的影响

1 实验材料

1．1 病毒株和细胞株

1．2 实验药物

1．3 主要试剂

1．4 主要仪器

1．5 主要溶液的配置

2 实验方法

2．2 半数中毒浓度(TC50)的测定

2．3 人四型病毒(HAdV-4)的毒力测定

2．4 GA对HAdV-4的体外抑制作用(四种加药方式)

3 结果与分析

3．1 没食子酸(Gallic Acid，GA)对A549细胞的毒性试验

3．2 半数中毒浓度(TC50)的测定

3．3 HAdV-4的毒力(TCID50)测定

3．4 GA对HAdV-4的体外抑制作用(四种加药方式)

4 小结

第二章 没食子酸对人四型腺病毒基因拷贝数的影响

1 实验材料

1．1 病毒、菌株和细胞株

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

1．4 主要溶液配置

1．5 引物设计于合成

2 实验方法

2．1 阳性标准品的制备

2．2．建立SYBR Green l 荧光定量PCR标准曲线

2．3 Real time PCR检测没食子酸对人四型腺病毒基因拷贝数的影响

3 结果与分析

3．1 SYBR Green l PCR反应条件的确定及标准曲线的建立

3．2 Real time PCR检测没食子酸对人四型腺病毒基因拷贝数的影响

4 小结

第三章 没食子酸对人四型腺病毒衣壳蛋白的合成的影响

1 实验材料

1．1 主要材料和试剂

1．2 主要仪器

1．3 主要溶液配制

2．4 待检测蛋白样品上样量

2．5 电泳条件

2．6 转膜(湿转法)

2．7 封闭和一抗孵育

2．8 洗膜及二抗孵育

2．9 显影

3 结果与分析

4 小结

讨论

结论

参考文献

文献综述

致谢

简历