DAB2IP、ZEB1及E-cadherin在结直肠癌中的表达及相关性研究

摘要

目的：
　　研究DAB2IP在结直肠癌组织中的表达情况及其对结直肠癌EMT的影响，并分析DAB2IP、ZEB1、E-cadherin三者在结直肠癌中的相关性，初步探讨DAB2IP与ZEB1之间是否存在某种信号传导机制调控肿瘤EMT，为DAB2IP参与结直肠癌侵袭转移的分子机制提供新思路。
　　方法：
　　通过Oncomine数据库获取DAB2IP在结直肠癌组织中的表达分析、临床意义分析及预后分析;通过干扰DAB2IP的表达，运用实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹技术检测EMT相关标志物表达是否发生改变，研究DAB2IP对于结直肠癌EMT的影响;利用免疫组化染色技术检测DAB2IP、ZEB1及E-cadherin蛋白的表达情况，观察三者在正常结直肠组织及结直肠癌组织中是否存在差异表达，进一步了解三者与结直肠癌临床病理参数的关系，并且分析三者之间的相关性。
　　结果：
　　1.结直肠癌组织中DAB2IP mRNA表达量低于正常结直肠组织，并且随着组织学分级升高而降低，DAB2IP低表达可能预示着患者临床预后差，提示DAB2IP在结直肠癌的发生发展过程中起抑制作用。
　　2.干扰DAB2IP后，上皮表型标志物E-cadherin表达降低，间质表型标志物Vimentin表达升高，EMT转录因子ZEB1、Snail及Slug表达升高，提示干扰DAB2IP可促进结直肠癌EMT的发生。
　　3.DAB2IP蛋白在结直肠癌中的表达情况低于正常结直肠组织，并且随着组织学分级及临床分期提升而表达降低，提示DAB2IP表达下调在结直肠癌的发生发展中起着重要作用。
　　4.ZEB1蛋白在结直肠癌中的表达情况高于正常结直肠组织，并且随着组织学分级及临床分期提升而表达升高，提示ZEB1表达上调在结直肠癌的发生发展中起着重要作用。
　　5.E-cadherin蛋白在结直肠癌中的表达情况低于正常结直肠组织，并且随着组织学分级及临床分期提升而表达降低，提示E-cadherin表达下调在结直肠癌的发生发展中起着重要作用。
　　6.结直肠癌组织中DAB2IP的表达与ZEB1呈负相关，DAB2IP的表达与E-cadherin呈正相关，ZEB1的表达与E-cadherin呈负相关，提示DAB2IP与ZEB1之间可能存在某种信号传导机制使肿瘤细胞发生EMT。
　　结论：
　　干扰DAB2IP可促进结直肠癌EMT的发生;DAB2IP、ZEB与E-cadherin对结直肠癌的发生发展意义重大，三者在结直肠癌组织中的表达具有相关性。

目录

声明

摘要

1 研究背景

2 上皮-间质转化

3 DAB2IP在肿瘤中的作用

4 ZEB1、E-cadherin在肿瘤中的作用

5 DAB2IP、ZEB1及E-cadherin在肿瘤中的相关性

第一部分 基于Oncomine数据库分析DAB2IP在结直肠癌中的表达及预后意义

1 数据的获取

2 数据的分析方法

3 结果

3．1 DAB2IP在不同肿瘤类型中的表达

3．2 DAB2IP在正常结直肠组织及结直肠癌组织中的差异表达分析

3．3 DAB2IP与结直肠癌组织学分级的关系

3．4 DAB2IP对结直肠癌患者预后的影响

4 讨论

第二部分 干扰DAB2IP基因的表达对结直肠癌EMT的影响

1 实验材料

1．1 肠癌细胞株

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器与器材

2 实验方法

2．1 细胞复苏

2．2 细胞培养

2．3 细胞传代

2．4 干扰片段瞬时转染

2．5 实时荧光定量PCR检测方法

2．6 蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测方法

2．7 统计学分析

3 结果

3．1 DAB2IP在四种人结肠癌细胞株中的本底表达

3．2 siRNA干扰DAB2IP表达的效率

3．3 干扰DAB2IP对结直肠癌EMT相关标志物mRNA表达的影响

3．4 干扰DAB2IP对结直肠癌EMT相关标志物蛋白表达的影响

4 讨论

第三部分 DAB2IP、ZEB1及E-cadherin在结直肠癌组织中的表达及相关性分析

1．3 主要仪器与器材

2 实验方法

2．1 免疫组织化学染色方法

2．2 免疫组织化学染色结果判定标准

2．3 统计学分析

3 结果

3．1 DAB2IP蛋白在结直肠癌组织中表达的意义

3．2 ZEB1蛋自在结直肠癌组织中表达的意义

3．3 E-cadherin蛋白在结直肠癌组织中表达的意义

4 讨论

结论

参考文献

附录

文献综述 RasGAPs家族在肿瘤中的双重作用

致谢

作者简历