高脂饮食对小鼠摄食及情绪活动的影响及柴胡疏肝散的干预作用研究

摘要

目的：
　　本课题旨在探究高脂饮食对小鼠摄食及情绪活动的影响，及具有调畅情志、疏肝解郁作用的柴胡疏肝散是否能通过影响小鼠中枢神经系统中情绪调节因子的水平，调节下丘脑摄食肽的表达，进而调控食欲改变摄食行为。
　　方法：
　　1、将4周龄C57BL/6雄性小鼠，适应性喂养1周后，随机分为对照组和高脂组（High-fat Diet，HFD组），对照组小鼠和高脂组小鼠分别给与普通饲料、60％高脂饲料饲养;两周后再将高脂组小鼠按照随机数字表分为HFD模型组和柴胡疏肝散干预组，对照组和HFD组小鼠给予生理盐水灌胃，柴胡疏肝散组小鼠给予8.1g·kg-1·d-1的柴胡疏肝散灌胃，期间每周监测血糖及体重。
　　2、10周后分别进行胰岛素耐受实验(IPITT)及葡萄糖耐量实验(IPGTT)。于实验14周后利用能量代谢笼监测小鼠摄食、能量消耗、耗氧量及CO2产生量等能量代谢指标的变化。
　　3、行为学实验，通过旷场实验、悬尾实验、强迫游泳实验，检测各组小鼠的情绪状况。
　　4、采用Western Blot、免疫组织化学方法及Real-Time PCR检测检测下丘脑摄食相关蛋白及基因水平。
　　5、采用ELISA检测血清甘油三酯、胆固醇及海马区单胺类神经递质水平。
　　结果：
　　1、体重和血糖：与对照组相比，HFD组小鼠体重和血糖显著增加，柴胡疏肝散能够一定程度降低HFD饮食造成的体重和血糖的升高。
　　2、IPGTT和IPITT实验及血清脂质水平：与对照组比较，HFD组小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素敏感性降低，血清甘油三脂、胆固醇水平升高;与HFD组比较，柴胡疏肝散组能够一定程度改善小鼠的葡萄糖耐量但对胰岛素敏感性无影响，血清甘油三脂、胆固醇水平与HFD组无差别。
　　3、能量代谢：与对照组相比较，HFD组小鼠摄食量明显降低，O2消耗量、CO2释放量均降低，能量消耗减少;柴胡疏肝散组摄食量较HFD组有增加的趋势，O2消耗量、CO2释放量、能量消耗均较HFD组增加。
　　4、行为学结果：①旷场实验：Ⅰ、总的运动距离：HFD组小鼠总的运动距离少于对照组，柴胡疏肝散组总的运动距离较HFD组增加;Ⅱ、外周运动路程：HFD组低于对照组，柴胡疏肝散组较HFD组明显增加;Ⅲ、直立次数：HFD组直立次数少于对照组，柴胡疏肝散组直立次数较HFD组增加明显;Ⅳ、中心区停留时间：HFD组较对照组增加，柴胡疏肝散组与HFD组无差异。②悬尾实验：Ⅰ、不动时间：HFD组不动时间较对照组增加，柴胡疏肝散组较HFD组有下降趋势;Ⅱ、高幅度挣扎时间：HFD组挣扎时间短于对照组，柴胡疏肝散组挣扎时间较HFD组延长。③强迫游泳实验：Ⅰ、不动时间：HFD组不动时间较对照组增加，柴胡疏肝散组较HFD组有下降趋势;Ⅱ、高幅度挣扎时间：HFD组挣扎时间短于对照组，柴胡疏肝散组挣扎时间较HFD组延长。
　　5、摄食肽表达：PCR结果显示HFD组NPY mRNA、POMC mRNA水平较对照组降低，柴胡疏肝散组NPY mRNA、POMC mRNA水平较HFD组呈升高趋势，二者无统计学差异;Western Blot、免疫组织化学表明HFD组NPY、POMC蛋白较对照组表达降低，柴胡疏肝散组NPY、POMC蛋白水平较HFD组表达增加，无统计学意义。
　　6、海马区单胺类神经递质：HFD组海马区5-羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素水平都较对照组降低，柴胡疏肝散组5-羟色胺、多巴胺、去甲肾上腺素水平较HFD组升高，其中5-羟色胺升高具有统计学意义。
　　结论：
　　1、长期高脂饮食小鼠有发生抑郁情绪障碍的趋势，柴胡疏肝散能够增加海马区单胺类神经递质水平，尤其增加5-羟色胺水平改善其不良情绪，有一定的抗抑郁作用。
　　2、长期高脂饮食小鼠的摄食量降低，柴胡疏肝散能调节下丘脑摄食肽，一定程度促进小鼠进食的作用，并且能提高小鼠代谢速率，进而控制体重的增加。

目录

声明

摘要

第一章 前言

2．1 实验动物

2．2 饲养环境

2．3 药物

2．4 处理方法

2．5 主要试剂

2．6 主要实验设备

2．7 主要实验药品制备

第三章 实验方法

3．1 糖代谢的检测

3．2 脂代谢检测

3．2．1 血清甘油三脂(TG)的检测

3．4．2 鼠尾悬挂实验(tail suspension test，TST)

3．4．3 强迫游泳实验(forced swimming test，FST)

3．5 动物取材

3．6 海马区单胺类神经递质的测定

3．6．1 检测海马区5-羟色胺(5-HT)含量

3．6．2 检测海马区多巴胺(DA)含量

3．6．3 检测海马区去甲肾上腺素(NE)含量

3．7 免疫组化检测下丘脑NPY表达

3．8 Western Blot

3．8．1 组织蛋白的提取

3．8．2 BCA法测蛋白浓度

3．8．3 电泳

3．9．1 RNA提取

3．9．2 反转录

3．9．3 PCR扩增

3．10 统计分析

第四章 实验结果

1．小鼠体重变化情况

2．1 血糖情况

2．2 腹腔注射糖耐量实验(IPGTT)

2．3 腹腔注射胰岛素耐受实验(IPITT)

3．小鼠脂代谢情况

4．代谢笼相关结果

4．1 摄食量及能量摄入变化

4．2 能量代谢相关指标

5．1 下丘脑NPY表达

5．2 下丘脑POMC表达

5．2 下丘脑NPY、POMC mRNA表达水平

6．1 旷场实验

6．2 悬尾实验

6．3 强迫游泳实验

7．海马区单胺类神经递质水平

第五章 讨论

5．1 高脂饮食对小鼠行为学的影响及柴胡疏肝散的干预作用

5．2 柴胡疏肝散对长期高脂饮食小鼠单胺类神经递质的影响

5．3 柴胡疏肝散对高脂饮食小鼠下丘脑摄食肽的影响

5．4 肝主疏泄与情志调节

第六章 结论

英文缩略词表

参考文献

文献综述 柴胡疏肝散的抗抑郁作用研究进展

致谢

作者简历