面包小麦及其近缘种HMW谷蛋白亚基鉴定及其编码基因的分子克隆

摘要

小麦种子蛋白中的高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)是决定面团品质优劣的重要因素.因此,对HMW-GS的鉴定及其编码基因的分子克隆是当前的重要研究课题,对加速小麦品质改良以及了解贮藏蛋白基因家族的结构、功能及其分子进化关系具有重要意义.该实验以面包小麦(Triticum aestivum L.)及其近缘六倍体(Triticum spelta L.,Triticum compactum L,, 2n=6x=42,AABBDD)、四倍体(Triticumdicoccum L.,2n=4x=28,AABB)和二倍体种(AegiIops tauschii,2n=2x=14,DD)为材料,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)、双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DPAGE:A-PAGE×SDS-PAGE)以及高效毛细管电泳(HPCE)等方法对HMW-GS进行鉴定,并采用AS-PCR方法对小麦近缘种中的特异HMW谷蛋白亚基编码基因进行分子克隆与序列比较分析.一、 HMW-GS的凝胶电泳和高效毛细管电泳(HPCE)鉴定二、Glu-1位点编码的y-型HMW-GS基因PCR克隆及分析

目录

文摘

英文文摘

插图与附表

综述

一、小麦高分子量谷蛋白与品质关系

二、高分子量谷蛋白分离分析方法

1、丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)

2、反相高效液相色谱(RP-HPLC)

3、高效毛细管电泳(HPCE)

三、高分子量谷蛋白亚基及其编码基因的分子结构

四、高分子量谷蛋白基因的分子克隆

1、PCR技术在HMW-GS研究上的应用

2、PCR技术在硬粒小麦、栽培二粒麦及其野生种HMW-GS研究中的应用概况

3、PCR克隆策略

五、本研究的基本思路与目标

1、HMW-GS高效毛细管电泳鉴定

2、近缘四倍体小麦中特异HMW-GS基因的分子克隆与序列分析

材料与方法

一、实验材料

二、高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)聚丙烯酰氨凝胶电泳(PAGE)分离

三、高效毛细管电泳(HPCE)

四、Glu-1位点编码基因的克隆

结果与分析

一、高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)的凝胶电泳鉴定

二、HMW-GS的高效毛细管电泳(HPCE)鉴定

三、Glu-1位点编码的HMW-GS基因PCR分析

1、硬粒小麦品种Simeto中Glu-1By8基因的PCR扩增

2、栽培二粒麦HMW-GS基因的PCR扩增结果

四、序列分析

1、Simeto中Glu-1By8基因及蛋白序列分析

2、栽培二粒麦中HMW-GS基因序列分析

五、所克隆基因与其它y-型和x-型HMW-GS基因核苷酸与蛋白质序列比较分析

1、基因上游DNA序列比较

2、N-端保守区比较

3、重复区段序列比较

4、C-端保守区比较

5、成熟蛋白氨基酸组成比较

6、HMW-GS基因、蛋白结构与分子进化分析

讨论

一、高分子量谷蛋白亚基(MW-GS)的分离与鉴定

二、HMW-GS基因的分子结构特点与进化

三、HMW-GS分子结构与面筋特性的关系

参考文献

作者简历

致谢