奇异果甜蛋白thaumatin基因二价载体在玉米中的共表达及其在酵母中的表达

摘要

Thaumatin是一种超甜蛋白，本实验室将thaumatin和PDI上游分别连上CaMV35S启动子，下游连上终止子，同时克隆于质粒pCAMBIA1302中，构建成二价协同表达载体pCAMBIA1302-TP，经测序证明了它们的正确性。将pCAMBIA1302-tha-PDI转入农杆菌LBA4404，侵染玉米18红新鲜幼胚及其诱导产生的胚性愈伤组织，拟通过组织培养技术得到玉米阳性植株。由于愈伤在侵染后分化条件的不成熟使本实验未能如期得到阳性植株，但摸索出了玉米幼胚诱导胚性愈伤的方法以及条件影响因素，并独创了一套切实可行的农杆菌介导转化玉米幼胚及胚性愈伤组织的可靠方法。鉴于奇异果甜蛋白thaumatin基因在玉米中难以表达的研究现状，本文拟将thaumatin基因转化酿酒酵母，获得转基因酵母菌株，再利用酵母菌的大规模发酵生产，获得大量的有活性的甜味蛋白。通过基因工程技术，本文构建了酵母表达载体pDBLeu-thamatin，经测序证明其正确性。将pDBLeu-thamatin转化酿酒酵母菌DY1457，通过PCR手段、提取酵母菌质粒及蛋白质SDS-PAGE电泳技术检测甜味蛋白基因在酵母中的表达情况，希望得到有表达活性的转基因酵母菌，从而进一步获得甜味蛋白大量表达的酿酒酵母。通过本实验初探了甜味蛋白在酵母中的表达，可为今后的继续研究以及进行大量表达生产甜味蛋白提供理论依据。

目录

论文说明：缩写符号说明

致谢

前言

1文献综述

1.1 Thaumatin的发现历史及生化特性

1.2 Thaumatin的甜味机理

1.3 Thaumatin的生理功能

1.4 Thaumatin的基因工程

1.5研究意义

1.6挑战与前景

2本论文实验设计流程图

2.1玉米篇

2.2酵母篇

第一篇奇异果甜蛋白thaumatin基因与蛋白二硫键异构酶PDI基因在玉米中的共表达

第一部分材料和方法

1.1试验材料

1.2实验方法

第二部分结果与讨论

2.1结果

2.2讨论

第三部分展望

第二篇奇异果甜蛋白thaumatin基因在酵母中的表达

第一部分材料和方法

1.1试验材料

1.2实验方法

第二部分结果与讨论

2.1结果

2.2讨论

第三部分展望

参考文献

附录Ⅰ化学药品的配制

附录Ⅱ玉米表达载体及酵母表达载体测序图

附录Ⅲ基因正义链全序列

附录Ⅳ硕士期间发表或接收的论文及其他科研工作