丙型肝炎病毒核心蛋白基因的表达载体构建及在酵母中的表达

摘要

目的 :为探讨丙型肝炎病毒 (HCV)核心 (core)蛋白的功能 ,在真核生物酵母细胞中表达HCV核心蛋白基因。方法 :用多聚酶链反应 (PCR)的方法在HCV全长质粒 pBRTM HCV为膜板扩增HCV核心蛋白基因 ,克隆到pGEM T载体中 ,双酶切后回收连接到酵母表达质粒 pGBKT7中表达。提取酵母蛋白质 ,进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western免疫印迹分析。结果 :成功构建HCV核心蛋白基因酵母表达载体 ,Western免疫印迹显示了HCV核心蛋白在酵母细胞中表达。表达产物在胞内存在 ,分子量 2 2 0 0 0ku左右。结论 :HCV核心蛋白在酵母中表达成功。