恶性肿瘤新标志物的发现及靶点药物研究

摘要

恶性肿瘤是目前威胁人类健康的三大”杀手”之一。因其生长迅速，造成组织器官的严重破坏，并且容易转移，给人类的健康带来很大的危害。因此，对恶性肿瘤来说，“早发现、早诊断、早治疗和有效治疗”具有极其重要的意义。本论文第一部分主要探讨ERGIC—53在白血病患者与正常人、CML患者不同临床阶段的表达水平差异，并在几个耐药细胞株及其敏感株中检测其表达差异，预期ERGIC—53成为白血病早期诊断和判断其所处临床阶段的新指标；整合素αvβ3表达于多种恶性肿瘤细胞表面，但它不表达于正常的内皮细胞，因此，它是一个很好的药物治疗靶点。本论文本第二部分对其新的小分子抑制剂IH1062(3，5—二氯苯基双胍)进行研究，探讨它在体内外对整合素αvβ3阳性的恶性肿瘤细胞诱导失巢凋亡和抑制转移的作用及机制。 1 ERGIC—53在白血病中的表达 我们通过PCR检测K562/A02与K562、K562/G01与K562、MCF—7/ADR与MCF—7、HL60/ADR与HL60四对细胞中的ERGIC—53表达水平，发现耐药株K562/A02、K562/G01和MCF—7/ADR的ERGIC—53 mRNA表达水平比其对应的敏感株高，分别是其敏感株的1.56倍、1.58倍和1.80倍(p<0.05)，而HL60/ADR与HL60对比并无此差异。这四对细胞株的共同点和区别就是：PgP参与了K562/A02、K562/G01和MCF—7/ADR三个耐药株的耐药的形成，具有药物外排“泵”功能，但是并不参与HL60/ADR耐药的形成。因此我们推测ERGIC—53与PgP的转运相关；104例白血病患者的骨髓和11位正常志愿者的外周血提取单个核细胞后进行实时定量PCR，白血病患者的ERGIC—53 mRNA平均表达水平是正常人的142.91±15.42倍(p<0.05)；在CML病人中，ERGIC—53 mRNA表达水平与其所处的临床阶段密切相关：急变期/加速期(314.28±34.73)高于慢性期(66.66±6.43)，慢性期高于缓解期(15.23±1.10)，p<0.05。因此，ERGIC—53表达水平的监测具有重要的临床意义，它可能会被用作白血病早期诊断，或用作辅助判断CML临床阶段的新指标。 2 IH1062诱导恶性肿瘤细胞失巢凋亡和抑制肿瘤转移的研究。 我实验室基于整合素αvβ3的晶体结构通过计算机虚拟筛选和粘附抑制实验，筛选出整合素αvβ3新的抑制剂IH1062，本研究对其进行更深一步的研究。主要目的是探讨IH1062对整合素αvβ3高表达的恶性肿瘤的作用及机制。IH1062在体外能够通过影响FAK的磷酸化诱导黑色素瘤细胞M21的失巢凋亡，此过程中有caspase级联的活化以及凋亡相关蛋白Survivin升高和Bcl—2/Bax比值升高。我们通过裸鼠尾静脉接种M21细胞的方法成功的建立黑色素瘤裸鼠肺转移模型，通过肺表面癌结节的情况评价肺转移的程度。结果显示，尾静脉接种1×106组，2×106组和5×106组M21细胞均能100％形成肺转移。1×106组，2×106组和5×106组平均每只裸鼠肺表面癌结节：83.92±8.04，70.43±6.13，88.35±12.02，三组之间没有明显差异，对照组没有癌结节出现。因此，用1×106个M21细胞尾静脉接种裸鼠即可建立M21的裸鼠肺转移模型，100％形成肺转移灶。我们应用此动物模型进行IH1062的初步体内药效学研究，结果显示阴性对照组(接种M21，不加药)、0.6 mg/kg组、1.2 mg/kg组和2.4 mg/kg组的癌结节数目均值分别为138.67±26.35、53.00±4.58、34.00±4.04和4.67±2.01。差别具有统计学意义。病理学分析可见，阴性对照组镜下多见大片肿瘤灶，甚至整个肺尖部布满肿瘤细胞；0.6 mg/kg组多见灶性转移灶，可见血管周围大量肿瘤细胞浸润；1.2 mg/kg组和2.4 mg/kg组多见灶性和小灶性肿瘤灶，有的肿瘤灶仅有几个肿瘤细胞组成，未见大片肿瘤灶。总之，靶向整合素αvβ3的小分子药物IH1062在体内外显示出诱导恶性肿瘤细胞失巢凋亡和抑制转移的作用，是一个很有潜力的整合素靶点药物。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部分ERGIC-53在白血病中的表达

第二部分IH1062诱导恶性肿瘤细胞失巢凋亡和抑制肿瘤转移的研究

第一章IH1062诱导黑色素瘤细胞M21失巢凋亡及机制研究

第二章黑色素瘤细胞M21裸鼠肺转移模型的建立

第三章IH1062抑制肿瘤转移的体内研究

结论

参考文献

附录

综述1整合素αvβ3抑制剂研究新进展

综述2A Review of ERGIC-53:Its Structure,Functions,Regulation and Relations with　Diseases

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