NanoLuc を利用した３分子間 PCA 原理に基づく 非競合免疫測定系

摘要

オープンサンドイッチ免疫測定法（OS 法）は、抗 体可変領域 VH-VL間の親和性が、抗原結合時に高まる ことを利用した免疫測定法であり、低分子でも非競合 的に測定が可能で、高感度かつ広い濃度範囲で検出で きる長所がある (1)。しかし従来の ELISA 法による検 出では、手間と時間を要する欠点があった。 そこで我々は FRET や分割酵素の活性回復等を利用 し洗浄を要しない圴相系 OS 免疫測定法を開発してき た。しかし OS-ELISA 法と比べ、Signal/ Background 比·検出可能濃度域において劣るという問題があった (2-4)。今回我々は、発光酵素NanoLuc (NLuc)を用いた 分割酵素の活性相補系 (NanoBiT)を発展させ、３分割 した酵素と OS 法に基づく抗原検出系の構築を行った。