一种提取茶树基因组DNA的方法——改良的CTAB法

摘要

由于茶树叶片中富含茶多酚和生物碱等次生物质，DNA的提取相对比较困难，未加预处理液的样品在提取过程中褐变现象明显，而且得到的沉淀为凝胶状，经纯化得到很少或者得不到DNA;而在提取前加入提取预处理液的样品，整个提取过程中提取液均保持原来的绿色，无褐变现象发生，并且得到的DNA经电泳检测显示条带整齐，无RNA或者多糖等杂质污染，无论从纯度还是浓度均符合试验要求。改良的CTAB法提取DNA具有步骤简单，耗时间少的特点，所用试剂也均为普通试剂。SDS异丙醇法步骤繁琐，且用到试剂较多。普通的CTAB法虽然步骤简单，但其主要用于草本植物和不含酚类或含酚类较少的植物的DNA的提取，并不适合富含多酚类物质的茶叶基囚组DNA的提取，而且不能有效去除蛋自质和多糖等其他杂质，对此，本研究采用酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)的试剂加以纯化，未纯化前呈现乳白色的沉淀物，沉淀呈透明状的黏稠物，得到了纯度高的DNA沉淀物。