猪繁殖与呼吸综合征病毒和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR检测方法的建立

摘要

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5'端非编码区基因序列，设计合成了1对特异性引物，参考本实验室针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白设计的引物，经过PCR反应条件的优化，建立了BVDV和PRRSV双重RT-PCR的检测方法。对于PRRSV和BVDV的cDNA最低检测量分别为3.8×10-4ng和7×10-4ng，对于猪瘟病毒(CFSV)、脑心肌炎病毒(EMCV)和猪圆环病毒2型(PCV-2)的PCR扩增结果均为阴性；用该方法对江苏省不同地区采集的75份仔猪的肺脏、脾脏和淋巴结等病料进行了检测，结果PRRSV有55份阳性，BVDV有14份阳性，PRRSV和BVDV混合感染的有12份，与PRRSV和BVDV单一RT-PCR的检测结果符合率分别为89.3%和92%。证明建立的双重RT-PCR检测方法可用于临床样品中BVDV和PRRSV的检测。