牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒双重RT-PCR的建立

摘要

参照GenBank中登录的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenzavirus 3，BPIV-3)和牛病毒性腹泻病毒(Boyine viral diarrhea virus，BVDV)全基因序列，分别针对BPIV3特异性NP蛋白保守基因和BVDV保守区段E2基因设计2对引物，经优化反应条件建立了快速鉴别BPIV-3和BVDV的双重RT-PCR诊断方法。在其最佳扩增条件：94℃30 s，56.2℃30 s，72℃1min，循环30次;72℃延伸5 min，16℃10 min;BVDV引物浓度为1.0μmol／L，BPIV-3引物浓度为0.5 μ mol／L。采用该方法检测BPIV-3和BVDV参考病毒，能同时扩增出425bp和294bp预期大小的特异性片段，而扩增牛传染性鼻气管炎病毒，牛合胞体病毒、猪瘟病毒以及牛支原体、大肠埃希氏菌、牛巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌和沙门氏菌等牛常见病毒和细菌均呈阴性反应。对参考病毒进行梯度稀释检测，结果证明该方法检测BPIV一3的灵敏度可达10一TCIDso／0.Iml，而BVDV的灵敏度达102TCIDso／O.Iml。