鸡SREBPl基因抗血清制备及组织表达特性分析

摘要

目的：制备鸡类固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的多克隆抗血清，并分析其组织表达特性。方法：利用DNAStar软件对鸡SREBP1入核部分蛋白进行分析，预测其主要抗原决定簇区域;利用RT-PCR的方法扩增编码鸡SREBP1主要抗原决定簇的基因片段(832-1302bp)，构建原核表达栽体pGEX-4T/SREBP1;诱导重组蛋白GST/SREBP1表达并纯化后，以其为免疫原制备鸡SREBP1的多克隆抗血清;通过ELISA和Western blot的方法检测抗血清的效价和特异性，并利用此抗血清分析SREBP1基因在肉鸡组织中的表达特性。结果：ELISA测定抗体效价为1：102400，Western blot结果显示抗体具有较高的特异性;SREBP1基因在肉鸡腹部脂肪组织和心脏组织中有较高表达，在肝脏、肌胃、十二指肠、脾脏、肾脏等组织表达量较低，在胸肌和腿肌中没有检测到信号;SREBP1基因在高脂系公鸡腹部脂肪组织中的表达量显著高于低脂系公鸡腹部脂肪组织的表达量(P<0.05)。结论：本研究制备的鸡SREBP1的多克隆抗血清效价高、特异性强。SREBP1在肉鸡腹部脂肪组织高量表达。与低脂系公鸡相比，SREBP1在高脂系公鸡腹部脂肪组织的表达量较高。