鸭CD8α基因启动子的分析及转录活性鉴定

摘要

本研究的目的是对鸭CD8α基因启动子活性区域进行分析,为鸭CD8α基因功能和表达调控机理研究提供依据.利用前期基因组步移技术获得的鸭CD8α基因的启动子区序列,制备了一系列启动子缺失突变体(-625/-1bp,-1110/-1bp,-1413/-1bp,-2151/-1bp),定向亚克隆至荧光素酶表达载体pGL3-Basic中,构建了荧光素酶报告基因重组载体,采用Lipofectamine 2000将重组质粒瞬时转染DT40细胞,分析CD8α基因启动子系列缺失突变体在细胞内的转录活性.结果表明:鸭CD8α基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,-625～-1110bp启动子活性最强,且-625～-1bp区域和-625～-1110bp均存在着正调控元件.本研究成功构建了荧光素酶报告基因真核表达载体,初步确定鸭CD8α基因调控区,为进一步研究其转录调控机制奠定了基础。