气载H9亚型禽流感病毒荧光定量RT—PCR方法的建立

摘要

近十几年来禽流感(Avian Influenza，AI)在世界范围内流行严重，尤其是低致病性禽流感病毒(AIVirus，AIV)H9N2亚型流行面广，在众多国家引起了鸡严重的呼吸道疾病，对养禽业造成严重的危害。为了及时准确地对鸡舍及其周边环境H9亚型AIV气溶胶发生及其含量予以监测，本研究针对H9基因的保守区设计的特异性的引物和探针，并对其特异性、敏感性、重复性进行检测，利用AGI-30 Impinger进行鸡舍空气采样，建立了检测禽舍环境中气载H9亚型AIV的荧光定量RT-PCR方法。该方法对H9亚型AIV具有特异性；通过对10倍比稀释的H9基因片段的质粒标准品进行定量检测，灵敏度达到100 copies／reaction，并且具有很好的重复性；用AGI-30Impinger收集鸡舍环境中的空气样品，与建立的针对禽流感H9亚型特异性的荧光定量PCR方法相结合，在鸡舍环境中检测到气载H9亚型AIV的浓度为1.25×104～2.66×104 copies／m3 air。该方法的建立对于及时捕获H9亚型AIV流行信息，评估其传染危害非常必要。