丙硫咪唑对家蚕微孢子虫β-tubulin基因表达抑制作用的研究

摘要

丙硫咪唑能够特异性结合在微孢子虫的β微管蛋白基因上，抑制β微管蛋白与α微管蛋白组装微管或使已组装的微管解聚，使纺锥体不能形成，从而抑制细胞的有丝分裂。为了从分子生物学角度验证丙硫咪唑对家蚕微孢子虫治疗作用的效果，阐明其药理机制，本文选用家蚕品种P50为实验对象，采取2种不同处理方式(1、接种家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)2、接种N.bombycis后再添食丙硫咪唑)，在6个不同时段(丙硫咪唑处理后6h、18h、30h、42h、66h、90h)分别取中肠组织，以家蚕β-actin基因为内参基因进行不同样品之间mRNA量校正，分析家蚕微孢子虫β-tubulin基因相对表达量差异。提取中肠组织总RNA后，检测其质量和浓度，然后去基因组DNA，再反转录成 cDNA，再用PCR检测模板质量，最后用实时荧光定量PCR检测和分析结果，建立SYBR Green实时荧光定量PCR基因相对定量表达技术平台。结果表明：PCR内参基因和目的基因只有特异性目的条带，溶解曲线呈单峰，无基因组DNA污染，扩增效率在80%-120%之间，用2-△△Ct法计算得到在中肠中随着时间增长，添食丙硫咪唑的家蚕β-tubulin基因表达量相对于只添食家蚕微孢子虫的值越来越小，在90h达到最低为0.004，抑制作用越来越明显。