同时检测美洲型及欧洲型PRRSV的多重RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要

为了建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的快速鉴别检测方法，本研究针对PRRSV基因序列设计3对特异性引物，即1对通用引物扩增美洲型和欧洲型毒株ORF7基因433 bp/398 bp片段、1对引物扩增美洲型经典毒株和变异毒株Nsp2基因338 bp/248bp片段、1对引物扩增欧洲型毒株ORF5基因614 bp片段。经过反应条件的优化，建立了能同时检测并区分美洲型经典毒株、高致病性变异毒株以及欧洲型毒株的多重RT—PCR检测方法。该方法可以特异扩增3种病毒的基因，而与猪的其它重要病原均无交叉反应;3种病毒重组质粒标准品的检出下限均为1.67×103拷贝/μL。应用该方法检测176份临床疑似病料，结果PRRSV阳性45份，其中美洲型变异毒株41份、经典毒株4份，未检测到欧洲型毒株。表明，本研究建立的多重RT—PCR检测方法可以用于PRRSV的临床快速鉴别诊断和流行病学调查。