感染PRRSV猪肺泡巨噬细胞系表达炎性细胞因子

摘要

目的：对感染1型或2型PRRSV病毒株的永久的PAM细胞进行炎症细胞因子表达改变的研究，以使用PRRSV分离株开发体外系统研究免疫功能。方法：对PAM-pCD163接种PRRSV，通过观察CPE和免疫荧光实验确定病毒感染。感染后不同时间点(6，12，24，48小时)提取总RNA。使用DNase Ⅰ处理RNA，紫外分光光度计定量。使用oligo-dT引物对1mg的总RNA进行反转录，根据猪宿主免疫应答相关细胞基因序列设计引物，进行荧光定量PCR分析。结果：在2型PRRSV感染PAM细胞后24和48小时，IL-1α和IL-1β会被转录激活。另外，在PAM细胞中，2型PRRSV比1型PRRSV可以诱导更高水平的IL-6，IL-7和IL-8m RNA。1型PRRSV感染过的PAM细胞中L-1α表达稍微上调，IL-1β和IFN-γ不变或下调。1型PRRSV感染过的PAM细胞中MCP-2表达量很大，2型PRRSV感染过的PAM细胞中AMCF-1上调幅度最大。1型和2型PRRSV感染过的PAM细胞中TLR-3、4和7 mRNA表达显著下调或不变。结论：设计的基于PAM细胞的病毒感染方法，可以用来研究PRRSV发病机理和免疫情况，并可用来筛选有毒或无毒病毒株。