新型甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价

摘要

为了自新型甲型H1N1(2009)于2009年在世界多个国家暴发流行后，许多国家的猪群中也检测到该病毒的存在。猪作为流感病毒的”基因混合器”能够产生具有潜在危害的毒株。WHO、OIE和FAO联合要求加大对猪群中新型甲型H1N1(2009)的检测和监测，因此建立快速准确的新型甲型H1Nl检测方法成为迫切需求。本研究借助普遍使用的rRT-PcR技术，针对新型甲型H1N1(2009)病毒NA基因设计特异性引物和探针，建立新型甲型H1N1(2009)病毒特异性rRT-PCR快速检测方法。并将该方法与WHO推荐美国CDC建立的检测方法和美国农业部推荐的检测方法进行比较。通过田间实验验证该方法在实际应用中的效果。本研究中所建立的方法对检测甲型H1N1流感裂解疫苗的灵敏度可以达到10-6，与WHO推荐的A型流感实时荧光PCR检测方法的灵敏度一致，并且高于美国农业部推荐方法的检测灵敏度(10-5);本研究中所建立的方法特异性强，与经典型H1N1和其他亚型流感毒株无任何交叉反应。与香港兽医化验所进行了检测比对，检测灵敏度和特异性完全一致。近3 800份的田间试验表明，所建立的方法准确可靠。本研究中所建立检测方法快速灵敏，检测结果准确可靠，适合用于新型甲型H1N1(2009)流感病毒的分子生物学检测和监测。