高效合成青蒿素前体Amorphadiene的无质粒工程大肠杆菌构建

摘要

为了构建适于工业化生产的工程菌，我们尝试应用Red重组及IS负筛选策略将AD合成途径基因全部整合到大肠杆菌染色体上。首先将操纵子ES整合到DHGT7基因组上lpxM位点处，诱导表达合成甲经戊酸，在摇瓶中培养48h，甲经戊酸产量达到8.2g/L，是质粒载体的两倍。受其鼓舞，继续将MVD-ispA-ADS整合到基因组上另一位点处，阿拉伯糖诱导后AD合成水平达到390mg/L。这一结果提示，基因组整合表达异源合成代谢途径是提高目标产物合成能力的一种有效手段。所构建的工程菌在培养过程中不需要添加抗生素等选择压力来维持常规工程菌中质粒稳定性，产物诱导采用环保廉价的阿拉伯糖，因此更适于工业化生产。