人钙联蛋白S100A8/S100A9原核载体的构建与表达

摘要

目的:构建人钙联蛋白S100A8/S100A9的原核表达载体并进行蛋白表达及纯化,以作进一步研究.方法:从人单核巨噬细胞THP-1中提取总RNA,进行RT-PCR,得到目的基因,与TA克隆载体PMD进行连接,得到PMD-S 100A8/S 100A9质粒,BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切产物或者PCR产物双酶切,与大肠杆菌PET-32A表达载体进行连接,得到PET-32A-S100A8/S100A9重组质粒.重组质粒转入E.coli BL21(DE3)表达菌进行蛋白表达.融合His-tag蛋白用Ni柱纯化,冷冻干燥,进行下一步研究。结果及结论：成功构建了TA克隆质粒PMD-S100A8/S100A9及阳性PET-32A-S100A8/S100A9重组质粒，成功诱导蛋白的原核表达，为进一步研究S100A8/S100A9钙联蛋白的结构和功能提供了基础。