红细胞稀有血型筛选、建库与应用

摘要

目的：通过在献血者中筛选稀有血型,获得针对高频血型抗原组表达阴性的稀有表型,解决临床稀有血型血液供应困难的难题.方法：在国家“十一·五”和“十二·五”计划项目中,通过国内13个省级血液中心的联合,利用血型血清学方法和分子生物学方法,我们开展了针对Duffy,Kell,Kidd,MNS,Gerbieh,Diego,Yt,Lutheran,Colton,Ok以及ABO,Rh血型系统中高频抗原的筛选.在血清学筛选试验中,采用了适应于高通量的微量板法和改良的抗球蛋白法.这些方法在简化经典的间接抗蛋白试验的同时,又适用于血型自动化检测的需术.在这些血型系统稀有血型筛选中,有10多种稀有血型是通过筛选稀有等位基因的方法来完成的.通过组建多个多重PCR体系,我们成功地完成了针对k,s,Fy(a-),Co(a-),Yt(a-),Di(b-),Kp(c-),Kp(b-),Js(b-),Ok(a-)稀有等位基因的检测.由于单个实验室通常无法同时获各类稀有表型DNA作为分子诊断的实验对照,我们采用了定点诱变技术(SDM),通过环状诱变PCR方法,制备了各种稀有表型等位基因突变点片段,以用于分子生物学方法筛选稀有血型的对照.结果：在2008 ～2010年期间,参于项目的各单位共筛选献血者稀有血型135多万人次.其中北京、上海、广州、天津、武汉、浙江、江苏、成都血液中心筛选汉族献血者130万人次,新疆、内蒙、广西、昆明血液中心筛选少数民族献血者5万多人次.共获得各类稀有血型1000多例.其中包括极为罕见的Ko、Rhnull、Wr(b-)等稀有表型.众多新的血型等位基因和存于中国人群中的特殊遗传模式被发现.同时,也首次在中国人群中发现Yt(a-),Co(a-),Lu(a-b-)等稀有表型.2011年1月,中国稀有血型专业网站开通,通过信息发布、在线查询和BBS论坛讨论,进一步有益于稀有血型的信息交流与技术的推广.在最近2年的临床稀有血型输血应用中,共有＞4000 ml的稀有血液被用于临床抢救与治疗.结论：开展稀有血型筛选并建立全国性的稀有血型信息网络对解决临床稀有血型输注困难是有效的途径.扩大筛选的范围与增加筛选与验证的体系有助于中国稀有血型库的壮大.