少弱畸形精子症患者H19及MEST基因DNA甲基化分析

摘要

目的:比较正常生育男性及少弱畸形精子症患者父系印记基因H19及母系印记基因MESTDNA甲基化差异.方法:对所研究标本进行精液常规分析和精子形态分析,密度梯度离心法提纯精液.提取精液基因组DNA并进行亚硫酸氢盐处理,利用PCR体外扩增并将纯化后的PCR产物与pMD(R)18-T载体连接及酶切验证,并对阳性克隆进行测序和DNA甲基化程度差异分析.结果:所有正常生育男性H19 DNA是高甲基化的,甲基化率为100％,少弱畸形精子症患者DNA甲基化水平显著下降,甲基化率为93.05％,结果比较有显著性差异(P＜0.01).所有正常生育男性MEST DNA是低甲基化的,甲基化率为1.62％,少弱畸形精子症患者DNA甲基化水平有所升高,甲基化率为4.03％,结果比较差异无显著性(P＞0.05).结论:H19差异甲基化区域的甲基化异常和男性不育有关,它可能成为人类精子形成缺陷的一个生物标志.