白芷活性提取物对成纤维细胞生物学特性的影响

摘要

目的：体外观察白芷(Angelica dahurica)活性提取物对人皮肤成纤维细胞(fibroblasts,Fb)生物学特性的影响,初步探讨其促进创面愈合的可能机制。方法：分离培养人正常Fb,按照随机数字表法分白芷活性提取物不同浓度组,以0.25％fcs/DMEM为对照组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度白芷活性提取物对体外培养的Fb增殖作用的影响。通过流式细胞仪,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time PCR)分别检测白芷活性提取物最适浓度培养条件下Fb的细胞周期变化以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达情况。对实验结果进行单因素方差分析,用LSD-t检验行组间两两比较。结果：白芷活性提取物在5× 10-4g/L～5× 10-2g/L浓度范围内,可显著促进Fb增殖,呈剂量依赖性,不同浓度白芷活性提物培养液组测得OD值分别为(0.346±0.055、0.387±0.043、0.310±0.026)与对照组(0.273±0.042)相比差异具有统计学意义(t值分别为3.36、5.79、2.49,p值均小于0.05),其中在5×10-3g/L浓度时测得OD值最高,促增殖作用最为显著(t=5.79,P＜0.01)为白芷活性提取物促进Fb增殖的最适浓度。此浓度条件下白芷活性提取物可明显促进Fb通过G1/S及S/G2期限制点,S期及G2/M期细胞与对照组相比明显增多,G0/G1期细胞与对照组相比明显减少(t值分别为:11.2、5.69、2.44,P＜0.05)。Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达测定中,5×10-3g/L白芷活性提取物组与对照组比较Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达明显上调,差异亦有统计学意义t值分别为6.69、7.64,P＜0.01)。结论：白芷活性提取物能显著促进Fb增殖,加快Fb周期进程,同时可上调Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达,可能与白芷促进创面愈合的机制有关。