部分创面外用抗菌素、bFGF、EGF、rhGH对成纤维细胞、Hacat细胞生物学特性的影响

摘要

烧伤患者在治疗过程中将面临很多复杂问题，其中最核心的问题始终是烧伤的创面愈合。创面修复过程中，创面换药必不可少。理论上，应用创面外用药物的目的是为了更好的促进创面愈合，只是侧重点不同而已。在创面愈合的复杂机制中，成纤维细胞与表皮细胞的增殖和迁移是两个重要方面。成纤维细胞是构成肉芽组织的主要成分之一，可以合成和分泌胶原、纤维连接蛋白、透明质酸等细胞外基质，也可以分泌多种细胞因子参与创面愈合；表皮细胞的迁移、增殖、分化决定着创面再上皮化。目前临床外用药物种类、剂型繁多，外用药物的选择不够规范，一定程度上影响了临床治疗效果。为了进一步探索创面外用药物和rhGH对成纤维细胞、表皮细胞增殖的影响以及他们对成纤维细胞、表皮细胞的剂量-效应关系，用不同种类、浓度的创面外用药物作用于体外培养的成纤维细胞、Hacat，观察这些细胞的生物学特性改变，为临床外用药物的合理选择提供间接的理论依据。 目的： 1、建立稳定的成纤维细胞原代培养、Hacat传代培养，应用多种不同的创面外用药物、rhGH对细胞进行刺激，观察它们对细胞的影响。 2、观察同一种药物不同浓度对细胞的影响。 方法： 1、培养原代的成纤维细胞并进行稳定传代，对Hacat细胞进行传代培养。 2、做成纤维细胞与Hacat细胞标准曲线以明确药物刺激时培养细胞的密度和时机。 3、不同药物对培养细胞进行刺激后，倒置显微镜观察细胞形态学变化、MTT检测培养细胞的增殖情况以及流式细胞仪检测培养细胞周期。 4、同一药物不同浓度作用于培养细胞后，通过倒置显微镜、MTT实验和流式细胞仪观察对培养细胞的影响。 结果： 成纤维细胞： 1、形态学观察：对照组、EGF组、及0.160、1.600g/LrhGH组成纤维细胞数目较多，呈长条形或梭形，轮廓不清，透明度高；丁胺卡那霉素组、庆大霉素组、氯霉素组、磺胺米隆组细胞数目较少，形态不规则，轮廓清晰，透明度低，细胞内多有颗粒样物质及空泡。bFGF组、0.016g/LrhGH组细胞分布均匀、密集，呈长条形或梭形，核分裂相多见，轮廓不清，透明度高。 2、MTT法检测：与对照组吸光度OD值比较，各种剂量丁胺卡那霉素组、庆大霉素组、氯霉素组、磺胺米隆组成纤维细胞OD值均明显降低(p＜0.05或0.01)。其中氯霉素组存在组内差异，低浓度组OD值较中、高浓度组高(p＜0.05)。EGF组、及0.160、1.600g/LrhGH组OD值与对照组接近(p＞0.05)。 3、细胞周期检测：与对照组细胞增殖指数PI比较，0.210mg/L组丁胺卡那霉素组及0.160、1.600g/LrhGH组PI值无明显变化(p＞0.05)而EGF组、bFGF组及0.016rhGH组bFGF组PI值明显升高(p＜0.05)。 Hacat细胞： 结果： 1、形态学观察：对照组、庆大霉素组、bFGF组、丁胺卡那霉素0.021ug/ml组Hacat数目较多，呈长条形或梭形，轮廓不清，透明度高；丁胺卡那霉素0.21ug/ml、2.1ug/ml组、氯霉素组、磺胺米隆组、EGF组细胞数目较少，形态不规则，轮廓清晰，透明度低，细胞内多有颗粒样物质及空泡。rhGH组细胞分布均匀、密集，呈长条形或梭形，核分裂相多见，轮廓不清，透明度高。 2、MTT法检测：与对照组吸光度OD值比较，除庆大霉素组、丁胺卡那霉素0.021ug/ml组、bFGF组无变化外(p＞0.05)，其余各种剂量抗菌素组及EGF组Hacat细胞OD值均明显降低(p＜0.05或0.01)。其中氯霉素组、丁胺卡那霉素组存在组内差异，低浓度组OD值较中、高浓度组高(p＜0.05)。rhGH组OD值与对照组比较均增高(p＜0.05)，且存在组内差异，高浓度组OD值较中、低浓度组低(p＜0.05)。 3、细胞周期检测：与对照组细胞增殖指数PI值比较，bFGF组PI值无明显变化(p＞0.05)，0.210mg/L丁胺卡那霉素组、EGF组PI值明显降低(p＜0.05)而0.160、0.016g/LrhGH组PI值明显升高(p＜0.05)。 结论： 1、不同创面外用药物及rhGH对成纤维细胞、Hacat细胞生物学特性影响各异。 2、适当剂量的rhGH可以促进成纤维细胞、Hacat细胞增殖而大剂量的rhGH并不能促进成纤维细胞、Hacat细胞增殖。 3、氯霉素组对成纤维细胞和Hacat细胞增殖的抑制作用存在组内差异，中、高浓度组对细胞增殖的抑制作用高于低浓度组。 4、丁胺卡那霉素组对Hacat细胞增殖的抑制作用存在组内差异，中、高浓度组对细胞增殖的抑制作用高于低浓度组。 5、rhGH组对Hacat细胞增殖的促进作用存在组内差异，低浓度组对细胞增殖的促进作用高于中、高浓度组。

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摘要

前言

第一部分部分创面外用抗菌素、bFGF、EGF、rhGH对成纤维细胞生物学特性的影响

第二部分部分创面外用抗菌素与bFGF，EGF，rhGH对Hacat细胞生物学特性影响

全文结论

致谢

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参考文献

文献综述创伤愈合过程及EGF、FGF和GH在创伤愈合中的作用

攻读硕士学位期间撰写的文章