儿茶素与表儿茶素没食子酸酯联合后在体内外增强β内酰胺类抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用及作用机制研究

摘要

目的：前期研究发现儿茶素(C)和表儿茶素没金子酸酯(ECg)联合后在体外可以显著增强苯唑西林抗甲氧西林金葡菌(MRSA)的作用,因此,该研究旨在探讨这两种化合物具有抗菌增敏作用的最佳配伍剂量,在这个剂量下,对MRSA临床分离株的作用及其可能的机制.方法：以二倍稀释法观察C、ECG和几种β内酰胺类抗生素单独对MRSA WHO-2菌株的最低抑菌浓度(MIC),以棋盘法测定C和ECG联合β内酰胺类抗生素后对MRSAWHO-2菌株和45株MRSA临床分离株的MIC；以生物传感器测定PBP2a蛋白和C、ECg的亲和力；以荧光分光光度计法和激光共聚焦扫描显微镜法观察C和ECG单独及联合后对柔红霉素在MRSA WHO-2菌株菌体聚集的影响；以RT-PCR方法 观察C和ECG单独及联合对外排泵基因表达的影响；建立亚致死剂量脓毒症模型小鼠,用菌落计数的方法观察C和ECg联合后对脓毒症模型小鼠外周血内细菌数量的影响.结果：C和ECg单独没有抗菌增敏作用,CE(128 μg/mL C和16μg/mL ECg)可以显著增强β内酰胺类抗生素抗MRSA的作用,而对非β内酰胺类抗生素无效;CE可以增加柔红霉素在细菌菌体内的聚集,降低外排泵norA,norC,abcA基因水平的表达；更重要的是,CE可以降低亚致死剂量脓毒症模型小鼠外周血内细菌数量.结论：CE可以在体外内增加β内酰胺类抗生素抗MRSA的作用,可能与其增加药物在细菌菌体内的聚集,降低外排泵的基因表达水平有关.