结核分枝杆菌Rv3668c编码的丝氨酸蛋白酶引起细胞炎症反应的研究

摘要

本文通过在大肠杆菌中原核表达和纯化了该蛋白酶，并初步测定了该其酶活性。后续成功构建了穿梭质粒pNIT-Rv3668c，并电转化入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium Smegmatis)mc215标准株中，通过Western-blot验证目的蛋白成功表达。将重组菌MS- Rv3668c与MS-vector空载同时侵染U937细胞，检测胞内存活细菌的菌落形成单位(CFU)和细胞死亡裂解后释放至上清的乳酸脱氢酶(LDH)，测定Rv3668c的表达对宿主菌和U937细胞存活力的影响，在不同时间点检测了0937细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10四个细胞因子的表达。实验结果表明Rv3668c基因在重组耻垢分枝杆菌侵染巨噬细胞过程中，可增强自身存活力，并促进宿主细胞死亡，重组菌与空载相比，引起U937 TNF-α，IL-1β,IL-6细胞因子表达上升，IL-10表达下降。