靶向PRRSV的FnCas9-rgRNA敲除载体构建

摘要

为了检测靶向PRRSV的FnCas9-rgRNA敲除载体是否构建成功,试验先构建FnCas9-rgRNA敲除载体并对其进行测序,然后以EYFP为标记基因设计rgRNA并将其与Fncas9表达载体共转染HEK293细胞,判断是否有剪切力;同时以PRRSV病毒序列设计rgRNA并将其与Fncas9表达载体共转染Marc145细胞,判断是否具有活性,对FnCas9-rgRNA敲除载体初步的构建、载体活性进行了研究.结果表明:FnCas9-rgRNA敲除载体测序正确,流式细胞分析显示Fncas9-rgRNA敲除载体对细胞内EYFP基因的表达产生明显的抑制作用,表达荧光的细胞数量平均下降了12.4％,三种针对PRRSV设计的rgRNA,分别与Fncas9表达载体共转染细胞,再接种病毒后,细胞的病变情况明显比对照组程度低.说明靶向PRRSV的FnCas9-rgRNA敲除载体构建方式正确且FnCas9-rgRNA敲除载体具有活性.