JJY的遗传毒性试验研究

摘要

目的：通过Ames试验、小鼠骨髓红细胞微核试验、小鼠精子畸形分析试验综合评价JJY的遗传毒性,为其作为保健品开发提供依据. 方法：①Ames试验：选用组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌(TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535),采用平板掺入法,受试物分别用5％聚氧乙烯40氢化蓖麻油(5％RH40)和DMSO为溶媒,设5000.0、2000.0、800.0、320.0、128.0、51.2μg/皿共六个浓度组,同设自发回变对照组、5％RH40对照组、DMSO对照组和阳性对照组,在-S9/+S9条件下进行试验,每个浓度设置3个平行皿,37°C培养48～72h,人工计数回复突变菌落数,重复试验一次.②小鼠骨髓红细胞微核试验：将60只健康ICR小鼠按体重随机分为：阴性对照组、金龙鱼菜籽油溶媒对照组(10ml·kg-1)、环磷酰胺阳性对照组(40mg·kg-1)和JJY0.75、1.50、3.00g·kg-1三个剂量组,每组10只、雌雄各半.采用30h内2次灌胃给予法,两次给予间隔24h,于末次给药后约6h取小鼠胸骨骨髓涂片、固定,染色,油镜下观察小鼠骨髓嗜多染红细胞并计算微核发生率、PCE/(PCE+NCE)比值.③小鼠精子畸形分析试验：将60只健康ICR雄鼠按体重随机分为：阴性对照组、金龙鱼菜籽油溶媒对照组(10ml·kg-1)、环磷酰胺阳性对照组(40mg·kg-1)和JJY0.75、1.50、2.00g·kg-1三个剂量组,每组10只.各组均于首次给药后35天取小鼠附睾制备精子悬液,涂片、甲醇固定,2％伊红染色,高倍镜下观察小鼠精子,计算精子畸形率. 结果：① Ames试验:在-S9条件下，TA100在800.0、2000.0、5OOO.Oμg/皿剂量，TA 102在320.Oμg/皿剂量，TA1535在2000.0, 5OOO.Oμg/皿剂量的菌落数是自发回变菌落数的2倍以上，且结果均能重复;在+S9条件下，TA1535的5OOO.Oμg/皿剂量的菌落数是自发回变菌落数的2倍以上，且结果能重复，判断Ames试验结果为阳性。②小鼠骨髓红细胞微核试验:JJY 0.75,1.50, 2.OOg·kg-1剂量在30h内两次灌胃给予后的微核发生率分别为(O.11±0.10)‰、(0.16±0.17)‰、( 0.08±0.09 )‰，阴性对照、溶媒对照、阳性对照的微核发生率分别为((0.14±0.19)‰、( 0.09±0.11)‰,( 2.00±0.61)‰，JJY各剂量组微核发生率与阴性对照、溶媒对照组比较为p>0.05 ,试验结果为阴性。③小鼠精子畸形分析试验:JJY 0.75, 1.50, 2.OOg·kg-1剂量组的精子畸形率分别为(0.85±0.53 )%、(2.11±0.89 )%、( 2.25±0.73)%，阴性对照、溶媒对照、阳性对照的精子畸形率分别为(0.89±0.64 ) %, ( 0.96±0.73)%, (4.68±2.78) %，JJY 1.50, 2.OOg·kg-1剂量组的精子畸形率与阴性对照及溶媒对照组比较均有统计学意义(p<0.01)，且呈一定的剂量-效应关系，试验结果为阳性。 结论：JJY在-S9条件下对TA100, TA102, TA1535均具有致突变作用，在+S9条件下对TA1535具有致基因突变作用;3.OOg·kg-1剂量以下30h内灌胃给予两次对小鼠骨髓细胞染色体无损伤作用;0.75g·kg-1剂量以上灌胃给予5天对小鼠生殖细胞有致畸作用，提示JJY具有潜在的致突变和致畸作用。