泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立及应用

摘要

目的：建立特异、敏感、快速检测泰泽氏菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法. 方法：针对泰泽氏菌16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1156份临床样本中的泰泽氏菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照. 结果：泰泽氏菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肝螺杆菌、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌之间无交叉反应,检测灵敏度达2.2拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.204,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为100％.对1156份临床样本进行检测,结果TaqManMGB探针荧光定量PCR检出101份泰泽氏菌阳性样本,而普通PCR则仅检出44份阳性.TaqManMGB探针荧光定量PCR方法比普通PCR方法更敏感,能够直接从临床样本中检出泰泽氏菌DNA,检测时间仅为2h. 结论：TaqManMGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于泰泽氏菌的快速检测.