南方红豆杉水提物抑制EGFR旁路HGF/MET/STAT3、ERK通路克服阿法替尼耐药的体外实验研究

摘要

目的：研究南方红豆杉水提物对人非小细胞肺癌A549、H1975、H1993、PC9、PC9/R细胞系生长增殖的抑制及对HGF/MET信号通路的影响,初步明确南方红豆杉水提物通过调控HGF/MET下游的STAT3、ERK通路克服阿法替尼耐药的机制. 方法：采用水煎剂方式提取南方红豆杉,体外培养的人肺癌细胞株A549、H1975、H1993、PC9及其子细胞PC9/R,随机分成空白组、南方红豆杉水提物组、克唑替尼组、阿法替尼组、克唑替尼联合阿法替尼组、南方红豆杉水提物联合阿法替尼组和南方红豆杉水提物联合克唑替尼组,药物作用细胞24h后,采用Western-blot方法检测STAT3、P-STAT3、ERK1/2、P-ERK1/2、MET、P-MET蛋白表达水平,RT-PCR法测各细胞株MET、ERK1/2、STAT3mRNA表达水平. 结果：Western-blot检测结果：①与阿法替尼单药组相比,五个细胞株的红豆杉+阿法替尼组ERK、P-ERK、P-STAT3蛋白表达均明显降低(P＜0.05),H1993、H1975、PC9、PC9/R细胞株的P-MET有明显下调(P＜0.05),A549细胞株P-MET无明显变化,H1993细胞中的MET有明显下调(P＜0.05),而在A549、PC9、PC9/R、H1975无明显变化.②与对照组相比,在红豆杉组中：五个细胞株中的MET、P-MET、P-ERK蛋白表达均明显降低(P＜0.05),A549细胞中的ERK和PC9/R中的STAT3蛋白表达无明显变化.RT-PCR检测结果：①与阿法替尼组相比,5种细胞株联合组(红豆杉+阿法替尼)中的ERK1/2、STAT3mRNA表达均有极显著下调(P＜0.01);H1975、A549、PC9、PC9/R细胞株联合组MET mRNA表达极显著下调(P＜0.01),H1993细胞株联合组MET mRNA无明显变化.②与对照组相比,在红豆杉组中：A549、PC9、PC9/R、H1993细胞株中ERK1、ERK2mRNA极显著下调(P＜0.01);H1975细胞株中MET、ERK1mRNA极显著下调(P＜0.01);A549细胞株中的MET、STAT3和PC9中的STAT3以及H1975中的STAT3、ERK2,H1993中的METmRNA无明显变化. 结论：①南方红豆杉水提物联合阿法替尼能增强抑制人肺癌细胞系增殖并具有协同效果.②南方红豆杉水提物可能通过调控HGF/MET信号通路,抑制其下游STAT3、ERK1/2而克服阿法替尼耐药,达到抑制肿瘤的效果.