基于连接反应和磁珠富集的电化学发光方法检测样本中极低比例的点突变基因

摘要

在生物医学研究领域,检测微少突变基因是非常重要的.在这篇文章中,报道了一种基于电化学发光方法检测极微少突变基因的超灵敏技术.通过对点突变基因具有高度识别性的酶特异性连接反应(LDR)实现对点突变基因的特异性识别和扩增,而样本中大量的野生型基因不发生扩增,减少了样本中野生型基因对微少突变基因检测的干扰.然后采用磁性微球捕获和分离以点突变基因对应的连接产物,并且用电化学发光基团标记连接产物.最后采用电化学发光方法检测完整寡核苷酸链上的电化学发光分子信号,通过比较待检测基因样品与空白溶液的电化学发光信号强度的差异检测出点突变基因.这种基于连接反应和磁珠富集的电化学发光方法可以检测出样本中比例低至0.01％的点突变基因,而且由于样本中微少突变基因比例与对应的电化学发光信号强度之间存在较好的线性关系,可以通过测量样本的电化学发光信号强度,估算出样本中点突变基因的比例.开发的这种超高灵敏的突变基因检测技术具有检测灵敏度高、特异性好的优点,在肿瘤的个体化诊疗、分子遗传学检测等领域有很好的应用前景.