茶树中一种新的类丝氨酸羧肽酶基因的克隆及其原核表达

摘要

丝氨酸羧肽酶类蛋白已被证实具有酰基转移功能.本文在前期研究获得了新的类丝氨酸羧肽酶基因(CsSCPL4)片段的基础之上,采用RACE-PCR技术克隆了CsSCPL4基因全长cDNA序列(GenBank登录号:KX9267893),全长1726bp,其开放阅读框为1443bp,编码480个氨基酸,蛋白分子量估计为54612.1,理论等电点为5.40,该基因推测的氨基酸序列与巨桉、麻疯树、葡萄、蓖麻、甜菜亚种、野草莓亚种的相似性分别为75％、70％、67％、60％、58％、57％.为验证该基因的功能,采用pMAL-c5x原核表达载体,在大肠杆菌BL21表达了CsSCPL4蛋白.经过对表达条件的优化,获得了可溶性融合蛋白,该蛋白条带大小约为54000,与预测大小相符.