多基因修饰Treg的树突状细胞融合疫苗抗胰腺癌免疫效应的实验研究

摘要

目的：本研究旨在构建过表达Foxp3和A20miRNA修饰Treg的DSL6A/C1细胞与树突状细胞的融合疫苗,获得既有DC特殊功能又表达肿瘤抗原的新型肿瘤疫苗.检测融合疫苗中Foxp3和A20基因及蛋白表达情况,体外分析融合疫苗的活性、CTL杀伤力以及抗体分泌能力,初步探讨疫苗抗胰腺肿瘤的免疫效应. 方法：1.构建负载过表达Foxp3质粒和A20miRNA质粒,采用慢病毒法共转染到DSL6A/C1细胞,抗生素筛选稳转细胞株,利用PEG法与树突状细胞融合而构建融合疫苗,采用WBl、PCR检测Foxp3、A20的表达量.2.免疫磁珠分选纯化疫苗,流式细胞仪对融合细胞表型鉴定,MTr、Transwell检测多基因融合疫苗活性、迁移能力,LDH杀伤实验检测CD8+T对肿瘤细胞的杀伤作用,采用ELISpot技术检测CD4+T在肿瘤抗原刺激下IFN-γ,IL-2分泌格局. 结果：1.成功构建过表达Foxp3和A20miRNA质粒,共转入DSL6A/C1细胞,成功筛选稳转细胞株,WB、PCR检测Foxp3、A20基因及蛋白表达,Foxp3-A20修饰的大鼠胰腺癌DSL6A/C1细胞中Foxp3呈高表达,A20呈低表达.2.采用PEG法成功构建多基因修饰的融合疫苗.3.结果显示其多基因修饰的融合细胞增殖、侵袭力较单基因修饰及未基因修饰相比明显增强.4.多基因修饰融合疫苗组CD8+T细胞对DSL6A/C1细胞株的杀伤活性随效应细胞增多而增强且优于其他组.5.多基因修饰融合疫苗组能刺激CD4+T细胞分泌IFN-g和IL-2因子. 结论：过表达Foxp3及A20miRNA修饰的肿瘤细胞与DC细胞构成的融合疫苗,对Treg的功能和数量有较好的抑制作用.多基因修饰的融合疫苗对肿瘤细胞的增殖、侵袭能力,对肿瘤细胞的杀伤性及细胞因子分泌能力均较较单基因、未基因修饰融合疫苗效果显著.