KIR2DS1介导同种异体NK细胞对DC杀伤效应的实验研究

摘要

目的：本实验通过研究表达活化性KIR2DS1基因的NK细胞对DC的杀伤作用及分析体外KIR2DS1阳性的NK细胞与HLA-C2+DC相互作用后CCR7的表达,探究异源反应性NK细胞预防GVHD的机制. 方法：1.KIR及HLA-Cw基因检测：采用聚合酶链式反应和序列特异性引物(PCR-SSP)基因分型技术检测20例健康供者的KIR基因;采用聚合酶链式反应-直接测序分型法(PCR-SBT)检测20例健康供者和10例AML患者的HLA-Cw基因.2.NK细胞的分选及扩增培养：抽取符合实验要求的健康志愿者外周血,通过RosetteSep富集人NK细胞负选试剂盒分选NK细胞,采用流式细胞仪检测分选前后NK细胞的纯度.分选后的NK细胞体外扩增培养,培养14天.3.DC的体外培养及鉴定：抽取符合实验要求的初诊AML患者外周血,提取单个核细胞,于37°C、5％CO2饱和湿度培养箱中孵育2h,收集贴壁细胞用于诱导培养DC.4．CCR7阳性表达率的检测：采用流式细胞仪检测CCR7的表达。5．细胞杀伤活性的检测：采用CCK-8比色法检测效靶细胞比5:1、10：1、20：1条件下，NK细胞对DC的杀伤活性。 结果与结论：活化性KIR2DS1基因能有效介导同种异体NK细胞杀伤DC，降低GVHD的发生；同时与DC共培养后CCR7表达率增加，推断其与NK细胞获得趋化性能相关。从而为临床选择合适的供者提供依据。