苯乙基异硫氰酸酯诱导K562细胞凋亡及其机制研究

摘要

目的：本文旨在证实PEITC诱导慢性髓系白血病细胞系K562细胞凋亡的效应,初步探讨PEITC诱导K562细胞凋亡的可能机制,探讨调控血红素加氧酶-1表达对PEITC诱导细胞凋亡作用的影响,为慢性髓系白血病的治疗提供新的思路. 方法：培养K562细胞,MTT检测不同浓度PEITC处理后K562细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡和活性氧生成的情况;Realtime-PCR及Western Blot检测凋亡相关基因Cytochrome c,caspase3,caspase8,caspase9,Fas以及FasL mRNA及蛋白水平的变化.分别用HO-1诱导剂Hemin及抑制剂ZnppⅨ调控HO-1基因表达联合PEICT处理K562细胞后,Real-time PCR及Western blot检测处理后K562细胞中HO-1及凋亡相关基因mRNA及蛋白的表达.流式细胞术检测联合处理后的凋亡和ROS生成情况. 结果：MTT结果示PEITC作用K562细胞24，48，72小时后，细胞增殖抑制率呈现浓度—时间依赖性。流式细胞术显示PEITC能够诱导K562细胞的凋亡。Real-time PCR及Westem blot结果显示PEITC处理细胞后，HO-1表达下降，而凋亡相关基因Cytochrome c、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Fas及FasL表达增加，DCFH-DA探针法示PEITC作用K562细胞后，ROS生成增多。用HO-1诱导剂Hemin、抑制剂Zinc protoporphyrinIX、PEITC单药分别及联合处理K562细胞后，结果显示HO-1高表达后凋亡相关基因表达降低，细胞凋亡率及ROS生成下降。而降低HO-1表达能够促进凋亡相关基因的激活，细胞凋亡率及ROS生成增加。 结论：研究表明PEITC能够促进K562细胞凋亡，呈时间剂量梯度依赖关系；PEITC诱导K562细胞凋亡可能通过的机制包括ROS生成及凋亡相关基因Cytochrome c、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Fas及FasL的激活。HO-1高表达能够降低PEITC对K562细胞的促凋亡作用，相反抑制HO-1表达能够增强PEITC对K562细胞的促凋亡作用。HO-1在PEITC促K562凋亡过程及ROS生成中发挥重要的作用。