Gluconobacter Oxydans NH-10膜结合D-阿拉伯糖醇脱氢酶的纯化与性质研究

摘要

通过超高速离心收集细胞膜组分、表面活性剂溶解膜蛋白、硫酸铵沉淀、疏水作用层析、离子交换柱层析等纯化步骤,从氧化葡萄糖酸杆菌中获得具有D-阿拉伯糖醇脱氢酶活性的纯蛋白,该酶由两个大小不同的亚基组成,其表观相对分子质量分别约为80000Da和14000Da.酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为25～30°C,最适pH值为5.5～6.0;考察底物特异性发现该酶不仅能催化D-阿拉伯糖醇,还可以催化山梨醇、甘露醇、赤藓糖醇、甘油和2,3-丁二醇等多元醇类物质的脱氢还原反应;二价离子Ca-2+可以显著促进该酶酶活的提升,而Cu2+、Fe3+、EDTA等对此酶活性均有抑制作用;通过提取分离得到该酶的辅因子,经HPLC鉴定为吡咯喹啉醌.