大鼠EPHX2基因过表达对P65 mRNA表达的影响

摘要

目的:构建大鼠EPHX2基因的过表达重组质粒,转染至人胚肾293T细胞,检测其在细胞中的表达及对P65 mRNA水平表达的影响.方法:提取大鼠肾脏组织总RNA,应用RT-PCR方法扩增编码EPHX2基因的cDNA,克隆至T-载体并测序,经亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,酶切鉴定并再次测序,获得过表达重组质粒.用磷酸钙共沉淀法将重组质粒DNA瞬时转染至HEK293T细胞,Westem Blot方法检测重组质粒在蛋白水平的表达,RT-PCR方法检测其对P65 mRNA水平表达的影响.结果:1)测序结果证实PCR扩增获得编码大鼠EPHX2的cDNA序列正确;2)磷酸钙共沉淀法转染HEK293T细胞后,融合蛋白成功表达;3)RT-PCR结果显示重组质粒转染组P65mRNA表达升高.结论:成功构建大鼠EPHX2的重组质粒,该重组质粒可在HEK293T中过表达并升高P65 mRNA水平的表达.