5型磷酸二酯酶抑制剂通过BMP信号通路改善血管内皮细胞损伤

摘要

目的：探讨氧化应激状态下,5型磷酸二酯酶抑制剂伐地那非对原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡保护作用的影响及其意义.方法：运用HUVECs建立氧化应激模型,随机分为5组:1)盐水对照组;2)氧化应激组(200μM H2O2处理24小时);3)伐地那非小剂量干预组(100nM伐地那非预处理30分钟后给予200μM H2O2处理24小时);4)伐地那非大剂量干预组(500 nM伐地那非预处理30分钟后给予200μM H2O2处理24小时);5)伐地那非+6-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基-3-(4-吡啶基)吡唑并[1,5-a]嘧啶(Dorsomorphin)干预组(100nM伐地那非预处理30分钟后给予200μM H2O2+dorsomorphin处理24小时).MTT法检测细胞存活状态.5-溴脱氧尿嘧啶核苷法(BrdU)和原位缺口末端标记法(TUNEL)分别检测各组细胞增殖和凋亡状况.Western blot检测细胞内BMP受体Ⅰ A(BMPRⅠA)、BMP受体ⅠB(BMPRⅠB)、BMP受体Ⅱ(BMPRⅡ)、p-Smad蛋白的表达.Real-time PCR法检测细胞核内转录因子MSX2的表达情况.结果：1)与盐水对照组相比,氧化应激组TUNEL阳性细胞数明显增多(5.00±1.58 vs.31.5±6.3,p＜0.01),给予伐地那非处理后,TUNEL阳性细胞数降低(31.5±6.3 vs.18.5±5.2,p＜0.05);与氧化应激组比较,Dorsomorphin组TUNEL标记细胞无明显改善(31.5±6.3 vs.36.00±4.1,p＞0.05);2)与盐水对照组相比,氧化应激组BrdU阳性细胞数明显降低(8.25±1.9 vs.26.25±6.2,p＜0.01),给予伐地那非处理后,BrdU阳性细胞数明显增加(8.25±1.9vs.16.00±3.8,p＜0.05);与氧化应激组比较,Dorsomorphin组BrdU标记细胞无明显改善(8.25±1.9 vs.7.50±2.9,p＞0.05);3)与盐水对照组相比,氧化应激组BMPR Ⅰ A、BMPRⅠB、BMPR Ⅱ、p-Smad蛋白表达水平均明显增加(p＜0.05);给予伐地那非处理后,BMPR Ⅰ A、BMPR Ⅰ B、BMPR Ⅱ、p-Smad蛋白表达较前明显改善(p＜0.05);4)与盐水对照组相比,氧化应激组核内转录因子MSX2 mRNA表达明显降低(1.03±0.32 vs.0.64±0.15,p＜0.05),给予伐地那非处理后,转录因子MSX2 mRNA表达明显改善(0.64±0.15 vs.0.79±0.37,p＜0.05).结论：氧化应激通过上调内皮细胞BMP信号通路,诱导其凋亡并抑制其增殖,5型磷酸二酯酶抑制剂伐地那非通过BMP信号通路改善氧化应激引起的内皮细胞损伤.