心脏营养素-1促进脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞的实验研究

摘要

目的：研究心脏营养素-1(CT-1)是否能促进经5-氮杂胞苷(5-AZA)诱导的UCMSCS分化为心肌样细胞,并通过实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因Alpha-cardiac actin、Beta-MHC、GATA4、Nkx2-5的表达量并进行分析.方法：自健康足月妊娠孕妇脐带分离、纯化UCMSCS,培养后分析细胞生长曲线及流式细胞仪测定细胞生长周期.取第4代UCMSCS分别以普通培养基(A组)、加入含0.1nmol/L心脏营养素-1(CT-1)的培养基(B组)、经10umol/L5-aza诱导后加入普通培养基(C组)及10umol/L5-aza加入含不同浓度CT-1的培养基D组(包括D10.01nmol/L、D20.1nmol/L、D31nmol/L)培养.各目的基因分别设计一对引物,并进行SYBR Green染料法定量PCR扩增,使用2-△△CT法计算各分组中目的基因的表达差异.结果：基因Alpha-cardiac actin:D组表达均较空白组明显增加,以D2组为著,差异有统计学意义(P＜0.05);基因Beta-MHC:表达未见增加;基因GATA4:D组表达均较空白组增加,以D1组为著,差异有统计学意义(P＜0.05);基因Nkx2-5:D组表达均较空白组增加,以D3组为著,差异有统计学意义(P＜0.05).结论：从脐带分离培养的细胞具有UCMSCS的生物学特性.CT-1可明显促进5-AZA诱导的UCMSCS分化为心肌细胞,不同的相关基因的表达增加量与CT-1的浓度有关.