氨代谢双通路的同时恢复不能进一步提高HepG2细胞的降氨能力

摘要

目的:探讨氨代谢双通路的同时恢复是否能够进一步提高HepG2细胞的降氨能力及其可能机制.方法:采用携带hGS基因的重组逆转录病毒感染过表达hArgⅠ和hOTC的HepG2细胞HepG2/(hArgI十hOTC)4,筛选一株新的重组HepG2细胞HepG2/(hArgⅠ+hOTC+AFhGS)1;采用细胞活力实验检测该细胞在高浓度氨环境中的耐受能力，通过谷氨酰胺和尿素合成量检测其实际降氨能力;并采用基因芯片分析hGS基因和hArgⅠ+hOTC基因的导入对HepG2细胞的细胞周期和凋亡相关基因表达的影响。结果:hGS基因导入HepG2/(hArgI+hOTC}细胞并不能明显提高其hGS蛋白的表达，却降低了hArgⅠ的表达。在含有10-15mM的谷氨酸以及60-180mM的NH4C1的培养条件下，HepG2/(hArgI+hOTC十AFhGS)1细胞的谷氨酰胺和尿素合成量明显低于HepG2/(hAtgI+hOTC)4细胞。此外，在培养的第5天和第7天，HepG2/AFhGS细胞的增殖明显落后于其它细胞，表明hGS的导入对于HepG2细胞而言并不是有利因素，重要原因是与细胞凋亡有关的BCL2表达明显降低。结论:本研究的一系列实验证明通过恢复两条氨代谢通路来全面提高HepG2细胞降氨能力的设想并不成立。认为，尿素代谢通路(通路2)的恢复对于提高HepG2细胞的降氨能力更为重要也更有价值。