E3L缺失型天坛株痘苗病毒减毒载体的构建及筛选

摘要

利用PCR技术、DNA克隆技术构建携带有痘病毒早晚期强力复合启动子(PE/L)、天坛株痘苗病毒E3L基因外两侧同源重组臂、绿色荧光蛋白(EGFP)、loxp序列的穿梭质粒pSK-PTE-EGFP及用于敲除EGFP基因的质粒pvAX I-Cre。将痘苗病毒与pSK-PTE-EGFP采用顺序转染的方式转染BHK-21细胞进行同源重组，经绿色荧光蛋白筛选并连续蚀斑纯化含EGFP的重组病毒(rTTVV TE-EGFP)，而后与pVAX I-cre共转染BHK-21细胞，挑取单个无荧光蚀斑，纯化并应用PCR技术进行鉴定。结果成功筛选并获得E3L基因缺失天坛株减毒载体(rTTVV TE-).