猪大肠杆菌不耐热肠毒素LTB基因的克隆及原核表达

摘要

从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌，根据Genbank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)基因序列，设计一对引物，采用PCR技术扩增LTB的编码基因，得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体上，经酶切，PCR及序列测定法进行鉴定。测序正确后，将该基因插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达载体，将此重组质粒转化E-coli DE3感受态细胞，并用IPTG诱导，将诱导产物用SDS-PAGE和Wlestem-blot检测。结果显示LTB基因可以在大肠杆菌中高效表达，表达产物分子量约为14ku，与预计的蛋白分子量一致。Western-blot试验证明，该蛋白可以与大肠杆菌免疫血清产生特异性结合反应，具有良好的抗原性，为大肠杆菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。