微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母中的重组表达

摘要

微小毛霉(Mucor pusillus)凝乳酶是微生物凝乳酶的主要来源之一，但与传统的牛凝乳酶相比，尚具有一定的缺陷。为将其采用基因工程的方法进行改造获得理想的凝乳酶，本研究克隆了微小毛霉凝乳酶基因，构建了酵母表达质粒pPIC9K/M。线性化后电击转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115，在甲醇诱导下进行凝乳酶的表达，SDS-PAGE分析表明重组凝乳酶的分子量约为47 kD，培养基上清液中凝乳酶的活性为311.8SU/mL。本研究首次应用毕赤酵母表达微小毛霉凝乳酶，在培养基中获得分泌表达的重组凝乳酶。